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小鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒

本分離(li)液為Ficoll、羥乙基(ji)淀粉550與泛影酸葡jia胺的混(hun)合液。抗凝外周血可在分(fen)離液中分(fen)層。離心(xin)時，在Ficoll、羥乙基淀(dian)粉的(de)(de)作用下紅細(xi)胞(bao)(bao)與粒細(xi)胞(bao)(bao)聚(ju)集并迅(xun)速沉降；此時，淋巴細(xi)胞(bao)(bao)及其(qi)他單個核細(xi)胞(bao)(bao)仍(reng)處于分離(li)(li)液(ye)上層，紅細(xi)胞(bao)(bao)污(wu)染(ran)可忽(hu)略不(bu)計。大部分血小板(ban)可在細(xi)胞(bao)(bao)清洗低速離(li)(li)心過程(cheng)中(zhong)去除。 其(qi)他人(ren)及動物多種(zhong)比重細(xi)胞(bao)(bao)分離(li)(li)液(ye)，因不(bu)同(tong)種(zhong)屬不(bu)同(tong)比重分離(li)(li)液(ye)的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)離(li)(li)散系(xi)數及細(xi)胞(bao)(bao)帶電不(bu)同(tong)，用戶在制定(ding)分離(li)(li)液(ye)時應提供所(suo)需分離(li)(li)液(ye)的(de)(de)比重、動物種(zhong)屬及被分離(li)(li)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)名(ming)稱(cheng)。

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注意事項：

A．本實(shi)驗(yan)要求(qiu)，在正(zheng)常大氣壓下，分(fen)離(li)液(ye)、分(fen)離(li)樣本以及分(fen)離(li)環(huan)境溫(wen)度為20℃±2℃。分(fen)離(li)液(ye)在低溫(wen)時呈(cheng)較高密度，在高溫(wen)時呈(cheng)較低密度。細胞分(fen)離(li)液(ye)從冰箱取出后，不可立(li)即(ji)使用，操作(zuo)前可將樣本和(he)分(fen)離(li)液(ye)復(fu)溫(wen)18-22℃。為獲得實(shi)驗(yan)結果，建議在取血(xue)后2小時內(nei)進行實(shi)驗(yan)，血(xue)液(ye)提取后存放時間(jian)越(yue)長細胞活性越(yue)低。

B．實(shi)驗過程中，如需稀釋血液或(huo)洗滌細胞(bao)，不可使用(yong)含Ca、Mg離子(zi)的緩沖液及(ji)培養液，其(qi)成分會導致血細胞(bao)凝集，大(da)大(da)降低細胞(bao)得率及(ji)純(chun)度。

C．you抗(kang)(kang)凝劑選擇：EDTA、枸(gou)櫞酸、肝(gan)素，其(qi)他抗(kang)(kang)凝劑也可使(shi)用，但會影響細胞活性。應注意在血液稀釋(shi)過(guo)程(cheng)中(zhong)去(qu)除抗(kang)(kang)凝劑體積。

D．實驗操作時，不可(ke)使(shi)用含(han)粉手套(tao)、不可(ke)使(shi)用內(nei)毒素含(han)量過高(gao)的(de)液體，手套(tao)中的(de)粉末顆粒及(ji)高(gao)內(nei)毒素會激活淋巴細(xi)胞從而(er)降低細(xi)胞得率及(ji)活性(xing)。

E．本實驗不可(ke)使(shi)用(yong)高(gao)聚(ju)(ju)合材質（如(ru)聚(ju)(ju)苯乙烯）的(de)塑料制品，其帶有的(de)靜(jing)電作用(yong)將(jiang)導致(zhi)細胞貼壁影響分離(li)效果(guo)。推薦使(shi)用(yong)未(wei)經過(guo)堿處(chu)理的(de)玻(bo)璃離(li)心管。

F．吸取過(guo)(guo)多的淋巴細(xi)(xi)胞(bao)層(ceng)(ceng)及分離液(ye)(ye)(ye)層(ceng)(ceng)會(hui)導致分離液(ye)(ye)(ye)交界處(chu)的粒(li)細(xi)(xi)胞(bao)被(bei)吸出從而(er)使混(hun)雜(za)的粒(li)細(xi)(xi)胞(bao)數量增(zeng)加(jia)。吸取過(guo)(guo)多的淋巴細(xi)(xi)胞(bao)層(ceng)(ceng)上層(ceng)(ceng)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)會(hui)導致血(xue)漿(jiang)蛋白及血(xue)小(xiao)板(ban)混(hun)雜(za)。

G．如(ru)需進行B、T細胞計數，則(ze)需血液(ye)貯(zhu)藏時(shi)間不得(de)多于10小(xiao)時(shi)，否則(ze)將(jiang)導致細胞被激(ji)活，得(de)率降低。

H．為(wei)去除所混雜的(de)血小板(ban)，可在分(fen)離(li)液(ye)上(shang)層加上(shang)4-20%蔗(zhe)糖梯度等滲(shen)溶(rong)液(ye)進行二次離(li)心。

I．細(xi)胞純(chun)度可在(zai)步驟10后使用(yong)瑞氏染色方法(fa)確定，細(xi)胞活性可用(yong)臺盼藍處理后觀察。

J．由于各(ge)品牌離(li)(li)心機的(de)(de)性(xing)能不同(tong)，國內南北地區溫(wen)度環境和四季的(de)(de)差異，可能影響分(fen)(fen)離(li)(li)效果(guo)，用戶可以調節離(li)(li)心轉數和離(li)(li)心時間，摸索jia的(de)(de)分(fen)(fen)離(li)(li)條(tiao)件(jian)(jian)（具體分(fen)(fen)離(li)(li)條(tiao)件(jian)(jian)各(ge)實驗室自定）。

參考文獻：
《Alteration of Adaptive Immunity in a Colorectal Peritoneal Carcinomatosis Model》 作(zuo)者:Rongchen Shi,1,* Wei Xiang,1,* Xia Kang,1 Lili Zhang,2 Jinping Wang,3 Hongming Miao,1,? and Fengtian He 期刊(kan):JOURNAL OF CANCER  影響因(yin)子(zi):3.249 PMID:30719130

《Immunogenicity evaluation of MS2 phage-mediated chimeric nanoparticle displaying an immunodominant B cell epitope of foot-and-mouth disease virus》 作者:Guoqiang Wang, Yunchao Liu, Hua Feng, Yumei Chen, Suzhen Yang, Qiang Wei, Juan Wang, Dongmin Liu, Gaiping Zhang 期(qi)刊:PeerJ 影響因子:2.353 PMID:29844975