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維生素E檢測試劑盒說明書
分光光度法

注意：正式測定(ding)之前選擇2-3個預(yu)期(qi)差異大(da)的樣本做(zuo)預(yu)測定(ding)。

規格：50管/24樣

維生素E檢測試劑盒產品組成： 提取(qu)液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試(shi)(shi)(shi)劑(ji)一：液體(ti)5mL×1瓶(ping)(ping)，4℃避光保存(cun)。 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)二：液體(ti)5mL×1瓶(ping)(ping)，4℃保存(cun)。 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)三：液體(ti)5mL×1瓶(ping)(ping)，4℃保存(cun)。 試(shi)(shi)(shi)劑(ji)四：液體(ti)15mL×1瓶(ping)(ping)，4℃保存(cun)。

產品(pin)(pin)說明： 維生(sheng)(sheng)素(su)E（VitaminE）是一種(zhong)脂溶性(xing)維生(sheng)(sheng)素(su)，其水解(jie)產物(wu)(wu)為生(sheng)(sheng)育酚，是生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)體(ti)中主要的抗氧(yang) 化(hua)劑(ji)之一，能(neng)阻止不(bu)(bu)飽(bao)和脂肪(fang)(fang)酸(suan)收到過氧(yang)化(hua)作用(yong)的損傷，維持不(bu)(bu)飽(bao)和脂肪(fang)(fang)酸(suan)細(xi)胞(bao)膜的完整性(xing)和正常 功能(neng)，具(ju)有(you)(you)延緩衰老、預防溶血性(xing)貧血作用(yong)，在醫藥、化(hua)妝品(pin)(pin)、保健品(pin)(pin)、食品(pin)(pin)行業具(ju)有(you)(you)較(jiao)高(gao)的應用(yong) 價(jia)值(zhi)。 VE還原Fe3+為Fe2+，Fe2+與1,10-菲羅啉產生(sheng)(sheng)有(you)(you)色(se)絡合物(wu)(wu)，在530nm有(you)(you)特征吸(xi)收峰。 自備實驗用(yong)品(pin)(pin)及儀器(qi) 天(tian)平、研缽、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色(se)皿(min)、漩渦震蕩儀。

操作步驟：

一、樣(yang)本(ben)處理 1. 組織(zhi)：按照質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)體積(mL)為1：5~10的比例（建(jian)(jian)議(yi)(yi)稱取(qu)(qu)(qu)約0.2g，加(jia)入1mL提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)） 加(jia)入提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)，充分勻漿后(hou)用提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)定2mL，在漩渦混(hun)勻儀(yi)上(shang)震蕩5min，于(yu)(yu)25℃， 5000g離(li)(li)(li)心(xin)10min， 取(qu)(qu)(qu)上(shang)層(ceng)測(ce)(ce)定。 2. 細胞：按照細胞數(shu)量(liang)（104個）：提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)體積（mL）為500~1000：1的比例（建(jian)(jian)議(yi)(yi)1000萬細胞加(jia) 入2mL提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)），冰浴超(chao)聲(sheng)波破碎細胞（功率300w，超(chao)聲(sheng)3秒，間隔(ge)7秒，總時間3min）；在漩 渦混(hun)勻儀(yi)上(shang)震蕩5min，于(yu)(yu)25℃，5000g離(li)(li)(li)心(xin)10min，取(qu)(qu)(qu)上(shang)層(ceng)測(ce)(ce)定。 3. 血清：取(qu)(qu)(qu)0.2mL，加(jia)1.9mL提(ti)取(qu)(qu)(qu)液(ye)，漩渦儀(yi)混(hun)勻上(shang)震蕩5min，于(yu)(yu)25℃，5000g離(li)(li)(li)心(xin)10min，取(qu)(qu)(qu)上(shang)層(ceng) 測(ce)(ce)定。

二、測定操作 對(dui)(dui)照管 測定管 樣品（μL） 500 500 試(shi)劑(ji)一（μL） 100 100 試(shi)劑(ji)二（μL） 100 試(shi)劑(ji)三（μL） 100 充分(fen)混勻，25℃反應 5min 試(shi)劑(ji)四（μL） 300 300 充分(fen)混勻，于 1mL 玻璃比色皿，無水乙醇調零，測定 530nm 處吸光(guang)值(zhi)，記 為 A 對(dui)(dui)照管和 A 測定管，△A=A 測定管-A 對(dui)(dui)照管。

三、計算公式
標準曲線：y=0.022x+0.0065， R2=0.9978 1. 按(an)(an)照(zhao)蛋白(bai)(bai)含量(liang)(liang)計算(suan) VE含量(liang)(liang)（μg/mgprot）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（V樣(yang)(yang)×Cpr） =181.8×（△A-0.0065）÷Cpr 2. 按(an)(an)照(zhao)樣(yang)(yang)本質量(liang)(liang)計算(suan) VE含量(liang)(liang)（μg/g）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（V樣(yang)(yang)×W÷V樣(yang)(yang)總(zong)(zong)） =181.8×（△A-0.0065）÷W 3. 按(an)(an)照(zhao)細(xi)(xi)胞數(shu)量(liang)(liang)計算(suan) VE含量(liang)(liang)（μg/104 cell）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)(fan)總(zong)(zong)÷（V樣(yang)(yang)×細(xi)(xi)胞數(shu)量(liang)(liang)÷V樣(yang)(yang)總(zong)(zong)） =181.8×（△A-0.0065）÷ 細(xi)(xi)胞數(shu)量(liang)(liang) 4. 按(an)(an)照(zhao)液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)(ji)計算(suan) VE含量(liang)(liang)（μg/mL）=（△A-0.0065）÷0.022×V反(fan)(fan)(fan)總(zong)(zong)÷V樣(yang)(yang)×20 =1818×（△A-0.0065） V反(fan)(fan)(fan)總(zong)(zong)：反(fan)(fan)(fan)應總(zong)(zong)體(ti)積(ji)(ji)，1mL；：V樣(yang)(yang)：加入(ru)(ru)樣(yang)(yang)本體(ti)積(ji)(ji)，0.5mL；V樣(yang)(yang)總(zong)(zong)：加入(ru)(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ji)，2mL； Cpr：蛋白(bai)(bai)濃度，mg/mL；W：樣(yang)(yang)本質量(liang)(liang)，g 注(zhu)意事項： 1. 若反(fan)(fan)(fan)應體(ti)系(xi)產生沉淀，需要將樣(yang)(yang)品進(jin)行適(shi)當的稀(xi)釋，并在(zai)計算(suan)公式中乘以稀(xi)釋倍數(shu)。 2. 低檢出限為 29.5μg/g。