国产品无码一区二区三区在线蜜桃_人妻精品久久久久中文字幕_av无码免费一区二区三区_久久久久av无码免费网

人白細胞介素6ELISA 試劑盒
產品編號：SEKH-0013
適用于人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本

Human IL-6 elisa試劑盒

Human IL-6 elisa試劑盒

背景介紹：
     白細(xi)胞(bao)介素(su) 6(IL-6)是一種(zhong)由(you)淋巴、非淋巴細(xi)胞(bao)產生(sheng)的(de)多功能細(xi)胞(bao)因子。人 IL-6 的(de) cDNA 序列有 212 個(ge) 氨(an)基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)，含兩個(ge)潛在的(de) N -糖(tang)基(ji)化位點(dian)。成熟 IL-6 由(you)疏水 N 末端 28 個(ge)氨(an)基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)信號肽裂解產生(sheng)，含 184 氨(an)基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)，其(qi)中有四個(ge)半胱氨(an)酸(suan)殘(can)基(ji)，分子量為(wei) 21 kDa。IL-6 由(you)多種(zhong)細(xi)胞(bao)產生(sheng)，對免疫應答、急性 期反應、造血(xue)和神(shen)經系(xi)統(tong)有多方(fang)面作用(yong)。IL-6 的(de)生(sheng)物學活性主要包括 6 個(ge)方(fang)面：調節(jie)免疫應答、調節(jie)造血(xue) 系(xi)統(tong)、誘導急性期蛋白、調節(jie)腫瘤生(sheng)長、調節(jie)神(shen)經內分泌系(xi)統(tong)和其(qi)它。

檢測原理：
      Solarbio (Solarbio ®) ELISA 試劑盒采(cai)用基于雙抗(kang)(kang)(kang)體(ti)夾心法的(de)(de)(de)(de)(de)酶(mei)(mei)聯免疫吸附檢測技術。將抗(kang)(kang)(kang)人(ren)(ren) IL-6 單克 隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)包(bao)被在酶(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)板(ban)上；分別(bie)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)梯度稀釋的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)品和(he)(he)預稀釋的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)本，標(biao)(biao)(biao)準(zhun)品和(he)(he)樣(yang)本中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-6 會(hui)(hui)與酶(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao) 板(ban)上的(de)(de)(de)(de)(de)包(bao)被抗(kang)(kang)(kang)體(ti)充分結合(he)；洗板(ban)后(hou)(hou)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)生物(wu)素(su)化抗(kang)(kang)(kang)人(ren)(ren) IL-6 抗(kang)(kang)(kang)體(ti)，該抗(kang)(kang)(kang)體(ti)會(hui)(hui)與板(ban)子(zi)上包(bao)被抗(kang)(kang)(kang)體(ti)捕獲的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)品 和(he)(he)樣(yang)本中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-6 發(fa)生特(te)異性結合(he)；洗板(ban)后(hou)(hou)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)辣根過氧化物(wu)酶(mei)(mei)（HRP）標(biao)(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)(de)鏈(lian)霉親和(he)(he)素(su)，生物(wu)素(su)與鏈(lian) 霉親和(he)(he)素(su)會(hui)(hui)發(fa)生高強(qiang)度的(de)(de)(de)(de)(de)非共價結合(he)；洗板(ban)后(hou)(hou)加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)顯(xian)色(se)劑底物(wu) TMB，若反(fan)應孔(kong)(kong)中(zhong)(zhong)樣(yang)品存(cun)在不(bu)同濃度的(de)(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-6， 則 HRP 會(hui)(hui)使(shi)無(wu)色(se) TMB 變成不(bu)同深淺（正(zheng)相關）的(de)(de)(de)(de)(de)藍色(se)物(wu)質，加(jia)(jia)入(ru)(ru)(ru)終止液后(hou)(hou)反(fan)應孔(kong)(kong)會(hui)(hui)變成黃色(se)；后(hou)(hou)，在 λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定(ding)反(fan)應孔(kong)(kong)樣(yang)品吸光度（OD），樣(yang)本中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren) IL-6 濃度與 OD 成正(zheng)比，通過 繪制標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲線和(he)(he)四參數(shu)擬合(he)軟件便(bian)可計(ji)算出樣(yang)本中(zhong)(zhong)人(ren)(ren) IL-6 的(de)(de)(de)(de)(de)濃度。

原理圖：

注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免交(jiao)叉(cha)污染，請在試驗中使用 1 次(ci)性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑(su)料容器。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為(wei)保證(zheng)結果準確，每次(ci)檢測均需做標(biao)準曲(qu)線。

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物
實驗室安(an)全防護有關管理規定執(zhi)行(xing)。

自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管

樣本收集及儲存：
1. 細胞培養上清：
將細胞培養基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min ，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高
于(yu)標準品(pin)的值(zhi)，請將樣品(pin)做(zuo)適當倍(bei)(bei)數稀釋(shi)后檢測，建議正(zheng)式實驗前做(zuo)預(yu)實驗以確(que)定(ding)稀釋(shi)倍(bei)(bei)數。

試劑準備：
1. 試劑回溫：先在實驗前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現結晶，請放入
37℃溫浴直到結晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)梯度(du)(du)(du)稀(xi)釋(shi)：加入標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)/樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液(ye)（SR1）1ml凍干標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)中，靜置15分鐘待(dai)其(qi)(qi)*溶(rong)解(jie)后輕 輕混勻(濃(nong)度(du)(du)(du)為1000pg/ml)，然(ran)后在其(qi)(qi)余七管中各加入500?1?78?1?76L標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)/樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液(ye)（SR1），按(an)照以下濃(nong)度(du)(du)(du) 進行2倍稀(xi)釋(shi)：500、250、125、62.5、31.25、15.62、7.81 pg/ml進行稀(xi)釋(shi)。500pg/ml為標(biao)(biao)準(zhun)曲線點(dian) 濃(nong)度(du)(du)(du)，標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)/樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液(ye)（SR1）作為標(biao)(biao)準(zhun)曲線的(de)(de)零點(dian)（0pg/ml）。復溶(rong)過的(de)(de)標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)原(yuan)液(ye)（1000pg/ml） 未用完(wan)的(de)(de)應廢(fei)棄或(huo)根據需要按(an)照一次用量(liang)分裝(zhuang)，并將其(qi)(qi)貯(zhu)存在-20～-80℃冰箱(xiang)，具體如下圖。

4. 生物素化(hua)抗體(ti)工作液(ye)：預先計算好試驗(yan)所需用量，用檢測稀(xi)釋液(ye)（SR2）將(jiang)100倍(bei)抗體(ti)濃縮液(ye)稀(xi)釋成1倍(bei)

應用工作液（稀釋前充分混勻），請在(zai)30分鐘(zhong)內加入到(dao)反應孔中。

5. 酶結(jie)合(he)物工作液(ye)：按每(mei)次(ci)試驗所需(xu)用(yong)(yong)量配制(zhi)，用(yong)(yong)酶結(jie)合(he)物稀釋(shi)液(ye)（SR3）將100倍(bei)濃縮酶結(jie)合(he)物稀釋(shi)成1 倍(bei)應(ying)用(yong)(yong)工作液(ye)（稀釋(shi)前(qian)離心），請在(zai)30分鐘內(nei)使用(yong)(yong)。

6. 洗滌(di)方(fang)法： 

自動洗板(ban)：甩盡酶標板(ban)孔(kong)中液(ye)體，在(zai)厚迭吸(xi)水紙上(shang)拍干，注入洗滌液(ye)為 300ul/孔(kong),注 與吸(xi)出間隔為 30 秒，洗板(ban) 5 次。 

手工洗板(ban)：甩盡酶標板(ban)孔中液(ye)體，在厚迭(die)吸水紙上拍干，用(yong)洗瓶加入洗滌(di)液(ye) 300ul/孔，靜止 30 秒后甩 凈(jing)酶標板(ban)孔中液(ye)體，在厚迭(die)的吸水紙上拍干，洗板(ban) 5 次。

結果判斷：

1.用酶(mei)標儀 450 nm 波(bo)長測(ce)定(ding) OD 值。選擇雙波(bo)長檢測(ce)，參(can)考(kao)波(bo)長為(wei) 630 nm。如不(bu)能(neng)進行(xing)雙波(bo)長檢測(ce)，請(qing) 用 450 nm 的 OD 測(ce)定(ding)值減去 630 nm 的 OD 測(ce)定(ding)值。

2.計算(suan)標準品(pin)(pin)、樣品(pin)(pin)的平均 OD 值(zhi)：每(mei)個標準品(pin)(pin)和(he)標本的 OD 值(zhi)應減去零孔的 OD 值(zhi)

3.以標(biao)(biao)準(zhun)品濃(nong)度為橫坐標(biao)(biao)，吸光度OD值為縱坐標(biao)(biao)，用(yong)軟(ruan)件繪制(zhi)標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，樣品中IL-6含量可通過對應OD 值由標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)換(huan)算出相應的濃(nong)度。

4.若標(biao)本 OD 值高于標(biao)準曲線上限(xian)，應做(zuo)適當稀釋后重(zhong)新檢(jian)測，計算濃(nong)度時(shi)再乘以稀釋倍(bei)數。

1. 數據及標準曲線

本圖僅供參考，應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算人 IL-6 的樣本含量

 

2. 靈敏度：
低可檢測人 IL-6 濃度達 4pg/ml，
20 個零標準(zhun)品濃(nong)度 OD 的(de)平均(jun)值加(jia)上兩個標準(zhun)差，計算相(xiang)應的(de)可(ke)檢測濃(nong)度。

3. 特異性：
不與人 IL-6 sR、IL-9、IL-10 反(fan)應(ying)，小鼠 IL-6、IL-10、IL-11、IL-12 等反(fan)應(ying)。

4. 重復性：
板內，板間變異(yi)系數(shu)<10%。

5. 回收率：
在選取(qu)的健康人血漿(jiang)、細胞培養上清(qing)中加入 3 個不同濃度水平的人 IL-6，計算回收率(lv)。

6. 線性稀釋：

分別在選取的 4 份健康人血(xue)漿(jiang)和細胞(bao)培(pei)養上清(qing)中加入高濃度人 IL-6，在標準曲(qu)線(xian)動力學范(fan)圍內進行稀 釋(shi)，評估線(xian)性。