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Solarbio 大鼠外周血淋巴細胞分離液

本分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)為Ficoll、羥乙(yi)基淀(dian)粉550與泛影(ying)酸葡jia胺的(de)混合液(ye)(ye)。抗凝外周血(xue)可在分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)中分(fen)(fen)層(ceng)。離(li)(li)心時，在Ficoll、羥乙(yi)基淀(dian)粉的(de)作用下(xia)紅細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)與粒細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)聚集并迅(xun)速沉降(jiang)；此時，淋巴細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)及(ji)(ji)其他單個(ge)核細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)仍處于(yu)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)上(shang)層(ceng)，紅細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)污染可忽略(lve)不計。大部(bu)分(fen)(fen)血(xue)小板可在細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)清洗(xi)低速離(li)(li)心過(guo)程中去除。 其他人及(ji)(ji)動物(wu)多種比(bi)重細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)，因不同(tong)種屬(shu)不同(tong)比(bi)重分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)離(li)(li)散系數及(ji)(ji)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)帶電不同(tong)，用戶在制定分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)時應提(ti)供所需(xu)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)的(de)比(bi)重、動物(wu)種屬(shu)及(ji)(ji)被分(fen)(fen)離(li)(li)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)名稱。

適(shi)用于從動物(wu)抗凝血液中分離(li)(li)淋(lin)(lin)巴細胞(bao)，無菌(jun)條件下(xia)所分離(li)(li)的淋(lin)(lin)巴細胞(bao)可(ke)用于細胞(bao)培養等。本品僅供(gong)科研(yan)使用。

密(mi)度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細菌(jun)，需無菌(jun)條件操作。無菌(jun)條件下操作，啟封后(hou)置(zhi)常溫保存(cun)。如 4℃保存(cun)，本分離液(ye)易出現白色結晶，影響分離效果。

產品內容：

各種動物(wu)外周血(xue)淋巴細胞分離液 200mL

全(quan)血(xue)及組(zu)織稀釋液 200mL

細(xi)胞(bao)洗滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存，有效(xiao)期兩年。本品易感染(ran)細菌(jun)，需無菌(jun)條件下操作(zuo)。無菌(jun)條件下操作(zuo)，啟封后常溫保存。如4℃保存，本分(fen)離液易出現(xian)白色結晶，影響分(fen)離效(xiao)果(guo)。

操作步驟：

1. 取新鮮抗(kang)凝全(quan)血(xue)（EDTA、枸櫞酸(suan)鈉(na)或肝(gan)素抗(kang)凝均可）或者去纖維蛋白血(xue)液，用等(deng)體積的全(quan)血(xue)及組織稀釋液或者PBS稀釋全(quan)血(xue)。

2. 在離(li)(li)(li)(li)心(xin)管中加入(ru)適量分(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)（當稀釋(shi)(shi)后血(xue)液(ye)(ye)(ye)體積(ji)小(xiao)于(yu)(yu)3mL時，加入(ru)3mL分(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)；大于(yu)(yu)等于(yu)(yu)3mL，加入(ru)等體積(ji)分(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)。但(dan)二者(zhe)的(de)總體積(ji)不能超過(guo)離(li)(li)(li)(li)心(xin)管的(de)三分(fen)之二，否則(ze)會影響(xiang)分(fen)離(li)(li)(li)(li)效果(guo)），將稀釋(shi)(shi)后的(de)血(xue)液(ye)(ye)(ye)平鋪到分(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)液(ye)(ye)(ye)面(mian)(mian)上(shang)方，注意保(bao)持兩液(ye)(ye)(ye)面(mian)(mian)界面(mian)(mian)清晰。（可以(yi)使(shi)用巴氏德吸管吸取(qu)血(xue)液(ye)(ye)(ye)，然后將血(xue)液(ye)(ye)(ye)小(xiao)心(xin)的(de)平鋪于(yu)(yu)分(fen)離(li)(li)(li)(li)液(ye)(ye)(ye)上(shang)，因為兩者(zhe)的(de)密度差(cha)異，將形成明(ming)顯的(de)分(fen)層界面(mian)(mian)。如果(guo)樣品(pin)較(jiao)(jiao)多(duo)加樣時間較(jiao)(jiao)長(chang)，在離(li)(li)(li)(li)心(xin)之前(qian)出(chu)現紅細(xi)胞成團下沉屬正常現象。）

3. 室溫，水平轉子500~1000g，離(li)心20~30min（血液的體積越(yue)(yue)大(da)所需的離(li)心力越(yue)(yue)大(da)，離(li)心時間越(yue)(yue)長，的分離(li)條件需摸索，離(li)心轉速大(da)不超過1200g）。

4. 離(li)(li)(li)心后將出現(xian)明顯的(de)(de)分(fen)(fen)層：上層是稀釋的(de)(de)血(xue)漿(jiang)層，中間是透明的(de)(de)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)液層，血(xue)漿(jiang)與分(fen)(fen)離(li)(li)(li)液之間的(de)(de)白膜層即為(wei)淋(lin)巴細(xi)胞(bao)層，離(li)(li)(li)心管(guan)底部是紅細(xi)胞(bao)與粒細(xi)胞(bao)。

5. 小(xiao)心的吸取白膜層(ceng)細胞(bao)到(dao)15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細胞(bao)洗滌(di)液(ye)洗滌(di)白膜層(ceng)細胞(bao)。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或(huo)細胞(bao)清洗液重懸(xuan)細胞(bao)，250g，離心10min。

7. 重復步(bu)驟6

8. 棄上清，細(xi)胞重懸備用(yong)。

注意事項：

A. 開封前顛倒(dao)混勻(yun)，本分(fen)離液(ye)為(wei)無菌產品，為(wei)延長分(fen)離液(ye)保(bao)存時間(jian)，請(qing)在無菌條(tiao)件下啟封，避(bi)免微生物污染。。

B. 分離液(ye)(ye)使用時應始(shi)終保持(chi)室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將(jiang)分離液(ye)(ye)預熱。4℃或者(zhe)是溫度較低的(de)條件下(xia)離心，可能會(hui)導致白(bai)膜(mo)層中紅細胞污染(ran)加重。 

C. 血(xue)(xue)液樣本為(wei)新(xin)鮮(xian)抗凝(ning)血(xue)(xue)（采血(xue)(xue)2 h以內(nei)），為(wei)保持淋巴細胞的(de)活性(xing)，應避免冷凍和(he)冷藏。

D. 稀釋血液(ye)或洗滌細(xi)胞(bao)，不可使用含(han)Ca、Mg離子的緩沖(chong)液(ye)及(ji)培養液(ye)，其(qi)成分會導(dao)致血細(xi)胞(bao)凝集(ji)，大(da)大(da)降低(di)細(xi)胞(bao)得率及(ji)純度。

E. 部分(fen)塑料制品(pin)（如聚(ju)苯(ben)乙烯）因其帶有的(de)靜電作用(yong)，可能會(hui)導(dao)致細胞掛壁，影響分(fen)離(li)效果(guo)。

F. 血液樣本的粘稠度(du)或者是溫度(du)差異(yi)，可(ke)能會影響分離效果，可(ke)以調(diao)節離心轉數(shu)和離心時間，摸索

G. 吸(xi)取過(guo)多的淋巴(ba)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)層及分離液層會導致分離液交(jiao)界處(chu)的粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)被吸(xi)出從而使(shi)混雜的粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)數(shu)量增(zeng)加；吸(xi)取過(guo)多的血(xue)漿(jiang)層可能(neng)會導致淋巴(ba)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中血(xue)漿(jiang)蛋白及血(xue)小板污染。

H. 如果要進(jin)一步對分離(li)的細胞(bao)進(jin)行培養，那在收(shou)集血液(ye)和分離(li)過程(cheng)中，注意無菌操作，避免微生(sheng)物污(wu)染(ran)。

I. 不(bu)同動物血液在(zai)不(bu)同比重分離液中的(de)(de)細胞離散系(xi)數(shu)及細胞帶(dai)電不(bu)同，用戶在(zai)制定分離液時應提供所需分離液的(de)(de)比重、動物種屬(shu)及被(bei)分離細胞的(de)(de)名稱。

Solarbio 大鼠外周血淋巴細胞分離液