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P8630 大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
規格：200ml
保存：常溫

索萊寶 大鼠淋巴細胞分離液 P8630

Lymphocyte Separation Medium （Rat） 

P8630 大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
P8630-200 200ml           
說明：適用于從血液中分離所需細胞。
密度：1.0830±0.0001g/ml
儲存條件： 15-25℃避光保存，啟封后置4℃保存。

本分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)為Ficoll、羥乙(yi)基淀粉550與泛影酸葡(pu)jia胺的混合液(ye)。抗凝外周血可在分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)中分(fen)(fen)層。離(li)(li)心(xin)(xin)時，在Ficoll、羥乙(yi)基淀粉的作用(yong)下紅(hong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)與粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)聚集并迅速沉(chen)降(jiang)；此時，淋巴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)及(ji)(ji)其他(ta)單個核細(xi)(xi)胞(bao)(bao)仍處于分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)上層，紅(hong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)污染可忽略不(bu)(bu)計(ji)。大(da)部(bu)分(fen)(fen)血小板可在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)清洗低(di)速離(li)(li)心(xin)(xin)過程中去除。 其他(ta)人及(ji)(ji)動物(wu)多種(zhong)比重細(xi)(xi)胞(bao)(bao)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)，因不(bu)(bu)同(tong)種(zhong)屬不(bu)(bu)同(tong)比重分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)離(li)(li)散系(xi)數及(ji)(ji)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)帶電不(bu)(bu)同(tong)，用(yong)戶在制定(ding)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)時應提供所需分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)的比重、動物(wu)種(zhong)屬及(ji)(ji)被分(fen)(fen)離(li)(li)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的名(ming)稱。

適用于從(cong)動物抗(kang)凝血(xue)液中分離淋巴細(xi)胞(bao)，無菌(jun)條件(jian)下所分離的淋巴細(xi)胞(bao)可用于細(xi)胞(bao)培養等。本品僅供科研使(shi)用。

密(mi)度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細菌(jun)，需無菌(jun)條(tiao)件(jian)操(cao)作(zuo)。無菌(jun)條(tiao)件(jian)下操(cao)作(zuo)，啟封后置常溫保存(cun)。如(ru) 4℃保存(cun)，本分離(li)液易出現(xian)白色結晶，影響分離(li)效果。

產品內容：

各(ge)種動(dong)物外(wai)周血淋巴(ba)細胞分離(li)液 200mL

全血及組織(zhi)稀釋液 200mL

細胞洗(xi)滌液 200mL

保存：18℃-25℃保存，有(you)效期(qi)兩年。本品易(yi)感染細菌，需(xu)無菌條(tiao)件(jian)下(xia)操作(zuo)。無菌條(tiao)件(jian)下(xia)操作(zuo)，啟封后常溫(wen)保存。如4℃保存，本分離液易(yi)出(chu)現白色(se)結晶，影響分離效果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血(xue)（EDTA、枸(gou)櫞(yuan)酸鈉或(huo)肝素抗凝均可）或(huo)者去纖維蛋(dan)白血(xue)液，用等(deng)體積的全血(xue)及組織(zhi)稀(xi)釋(shi)液或(huo)者PBS稀(xi)釋(shi)全血(xue)。

2. 在(zai)離(li)(li)心(xin)管(guan)(guan)中加(jia)入(ru)適量分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)（當(dang)稀釋后血(xue)(xue)液(ye)(ye)體(ti)積小(xiao)于(yu)3mL時，加(jia)入(ru)3mL分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)；大于(yu)等于(yu)3mL，加(jia)入(ru)等體(ti)積分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)。但二(er)者(zhe)的總體(ti)積不能超過離(li)(li)心(xin)管(guan)(guan)的三分(fen)(fen)之二(er)，否(fou)則(ze)會影響分(fen)(fen)離(li)(li)效果），將稀釋后的血(xue)(xue)液(ye)(ye)平鋪到分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)液(ye)(ye)面(mian)上方，注意保持(chi)兩(liang)液(ye)(ye)面(mian)界(jie)面(mian)清(qing)晰(xi)。（可(ke)以使用巴氏(shi)德(de)吸(xi)管(guan)(guan)吸(xi)取血(xue)(xue)液(ye)(ye)，然后將血(xue)(xue)液(ye)(ye)小(xiao)心(xin)的平鋪于(yu)分(fen)(fen)離(li)(li)液(ye)(ye)上，因(yin)為兩(liang)者(zhe)的密度差異，將形成明顯(xian)的分(fen)(fen)層(ceng)界(jie)面(mian)。如果樣(yang)品較多加(jia)樣(yang)時間較長(chang)，在(zai)離(li)(li)心(xin)之前出現紅(hong)細胞成團下沉屬正(zheng)常現象(xiang)。）

3. 室溫，水平(ping)轉子(zi)500~1000g，離心20~30min（血液(ye)的體積越(yue)大所需(xu)的離心力越(yue)大，離心時間越(yue)長(chang)，分離條件需(xu)摸索，離心轉速大不超過1200g）。

4. 離心后(hou)將(jiang)出現明顯的(de)分(fen)層(ceng)：上層(ceng)是稀釋的(de)血漿(jiang)層(ceng)，中間是透明的(de)分(fen)離液(ye)層(ceng)，血漿(jiang)與分(fen)離液(ye)之間的(de)白膜(mo)層(ceng)即為淋巴細胞(bao)層(ceng)，離心管底部是紅細胞(bao)與粒細胞(bao)。

5. 小心的吸取白膜(mo)層(ceng)細胞到(dao)15mL潔凈的離心管中(zhong)， 10mL PBS或細胞洗滌(di)液(ye)洗滌(di)白膜(mo)層(ceng)細胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞(bao)(bao)清洗液(ye)重(zhong)懸細胞(bao)(bao)，250g，離心10min。

7. 重復(fu)步驟6

8. 棄上清，細胞(bao)重(zhong)懸備用。

注意事項：

A. 開封前顛倒(dao)混勻，本(ben)分離(li)液(ye)(ye)為無(wu)菌產品，為延長分離(li)液(ye)(ye)保(bao)存(cun)時間(jian)，請在無(wu)菌條件下啟封，避免微生物污染。。

B. 分離液(ye)使用時應始終保持室(shi)(shi)溫(wen)（18℃~25℃），如室(shi)(shi)內(nei)溫(wen)度(du)較(jiao)低，可將分離液(ye)預熱。4℃或者是溫(wen)度(du)較(jiao)低的條件下離心，可能會(hui)導致白(bai)膜層中紅細胞污染(ran)加重。 

C. 血液樣本為新鮮抗凝(ning)血（采血2 h以內），為保持(chi)淋(lin)巴(ba)細胞的(de)活(huo)性，應避(bi)免冷凍和冷藏(zang)。

D. 稀釋血(xue)(xue)液(ye)(ye)或洗(xi)滌細胞(bao)，不可使(shi)用含Ca、Mg離子的緩沖液(ye)(ye)及培(pei)養液(ye)(ye)，其成分會導致血(xue)(xue)細胞(bao)凝集，大大降低細胞(bao)得率及純度(du)。

E. 部分塑料制品(pin)（如聚苯(ben)乙烯）因其帶(dai)有的靜電作用(yong)，可能會導致(zhi)細(xi)胞掛壁，影響分離效(xiao)果。

F. 血液(ye)樣本的(de)粘稠度或者是溫(wen)度差(cha)異，可能會影響分離效果，可以調(diao)節離心轉數和離心時間，

G. 吸取過多的(de)(de)淋巴(ba)細(xi)(xi)胞層及分離(li)液(ye)層會導致分離(li)液(ye)交界處的(de)(de)粒(li)細(xi)(xi)胞被吸出(chu)從而使混雜的(de)(de)粒(li)細(xi)(xi)胞數(shu)量增加；吸取過多的(de)(de)血(xue)漿層可能(neng)會導致淋巴(ba)細(xi)(xi)胞中血(xue)漿蛋白及血(xue)小板污(wu)染(ran)。

H. 如(ru)果要進一步對分離的細胞進行培養，那(nei)在(zai)收集血液和分離過(guo)程中，注意無(wu)菌操作，避(bi)免微生(sheng)物(wu)污染。

I. 不同動(dong)物血液在(zai)不同比(bi)重分離液中的細胞離散系數及(ji)細胞帶電不同，用戶在(zai)制定分離液時(shi)應提供所需分離液的比(bi)重、動(dong)物種(zhong)屬及(ji)被分離細胞的名稱。