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內毒素去除劑產品(pin)簡介：    

        本公司(si)生(sheng)產的(de)(de)內(nei)毒(du)(du)素(su)(su)清(qing)除劑(ji)主要(yao)用于清(qing)除 DNA、蛋(dan)白(bai)質或(huo)其他液體(ti)(ti)樣(yang)品(pin)(pin)中的(de)(de)內(nei)毒(du)(du)素(su)(su)。在特定的(de)(de) pH 值、 鹽濃度和溫度條件下，內(nei)毒(du)(du)素(su)(su)清(qing)除劑(ji)能(neng)與 DNA、重組蛋(dan)白(bai)以及液體(ti)(ti)樣(yang)品(pin)(pin)中的(de)(de)內(nei)毒(du)(du)素(su)(su)特異性結合，經過室溫高(gao) 速(su)離(li)心(xin)后，DNA 或(huo)蛋(dan)白(bai)質等保留在水相(xiang)，而(er)內(nei)毒(du)(du)素(su)(su)則(ze)被(bei)濃縮到極小體(ti)(ti)積的(de)(de)下層相(xiang)而(er)被(bei)清(qing)除。經過 3 次以上重 復(fu)抽提后可將活(huo)性為 5000～50000 EU/ml 的(de)(de)內(nei)毒(du)(du)素(su)(su)水平降低(di)到 5～0.5 EU/ml 以下，即降低(di) 1000～10000 倍。

內毒素去除劑操作步驟：    

       提取前請將內毒素清除劑放在冰上冰浴 5min，期(qi)間翻(fan)轉瓶子數(shu)次使試劑均勻預冷。    

1、 a)已(yi)純化的質粒 DNA 內(nei)毒素清除：吸取(qu) 500μl DNA 溶液于微(wei)型離(li)心管，加入 1/10 體積 3M NaAc pH5.2 或 1/20 體積 5M NaCl 溶液，冰浴 5min。   

b)在(zai)提(ti)取(qu)質粒 DNA 過(guo)程(cheng)中清(qing)除(chu)內毒素：以(yi)堿裂解(jie)法提(ti)取(qu)質粒為例，在(zai)加入裂解(jie)液和中和液并離心(xin)去除(chu) 碎(sui)片(pian)之后，吸取(qu)含(han)質粒 DNA 的上(shang)清(qing)于新(xin)離心(xin)管中，冰浴 5min。   

 2、加(jia)入 1/5 體積預冷的內(nei)毒素清除(chu)劑，振蕩混勻，溶液(ye)變渾濁。    

3、冰(bing)浴 5min，溶液應變清亮(liang)。    

4、37℃水浴 5min，不時振蕩，溶液又變(bian)渾(hun)濁(zhuo)。    

5、12000rpm 室溫離心 5min，溶液應分(fen)為兩(liang)相，上(shang)層水相含(han) DNA，下層油狀相含(han)內毒素。   ; 

6、將(jiang)含 DNA 的上層水相(xiang)轉移到(dao)新管，棄油狀相(xiang)，重復抽提三次，即重復步驟 2-6 三次。    

7、加入(ru)(ru) 2.5 體積無水(shui)乙(yi)(yi)醇，-20℃沉(chen)淀(dian) 30min 或過夜；12000rpm 離心 10min，棄上清；加入(ru)(ru) 70％乙(yi)(yi)醇洗 滌(di)沉(chen)淀(dian)，12000rpm 離心 5min 棄上清；空(kong)氣干(gan)燥沉(chen)淀(dian)，加入(ru)(ru) 100～200μl 無內毒素的高純水(shui)或 TE 溶(rong)解(jie)沉(chen)淀(dian)。    

8、用內毒素檢測試劑(ji)測定樣(yang)品中內毒素活性，并與初始樣(yang)品比較(jiao)。

注意事項：

1、DNA 濃度>1mg/ml 時清除內(nei)毒素效(xiao)率降低。由于 DNA 和(he)蛋(dan)白質本身的(de)(de)性質，清除程序可導致 10-20 ％的(de)(de) DNA 丟(diu)失，所幸的(de)(de)是與清除內(nei)毒素的(de)(de)艱(jian)難相比(bi) DNA 更容易(yi)提取(qu)制(zhi)備。    

2、所(suo)有溶液應用無內毒素的高(gao)純水(shui)配制，所(suo)有器(qi)械材(cai)料均(jun)應不含內毒素，玻璃器(qi)皿可(ke)高(gao)溫烘烤，非(fei)揮發 性(xing)水(shui)溶液可(ke)高(gao)壓 120℃高(gao)溫處理?。