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solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒
 真菌是具有真核和細胞壁的異養生物。種屬很多，已報道的屬達1萬以上，種超過10萬個。真菌通常又分為三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。對于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理，而對于大型真菌，可直接用液氮研磨。經過前期處理的菌液，用硅質膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA，可以直接用于 PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應用實驗。
操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。 1、樣品的處理： 1）對于酵母菌，取1-2ml培養好的菌液，離心收集，棄上清。加入200ul 溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約5-10min。 2）霉菌(孢子也可相同處理)：取50-100mg菌絲，加200ul溶液A，用玻璃研磨器適當研磨分散菌絲，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約30min。 3）大型真菌（如蘑菇等）：稱取50-100mg樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重復3 次，使樣品研成粉末（如無液氮，可加200ul溶液A后用玻璃研磨器適當研磨），加200ul溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約5min。 2、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，55℃水浴消化，30min。消化期間可顛倒離心管混勻數次，12000rpm離心2min。將上清轉移到一個新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。 3、在上清中加入200ul溶液B，充分混勻。如出現白色沉淀，可放55℃水浴5min，沉淀即會消失，不影響后續實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能導致提取的DNA量少及不純，還有可能導致上柱后堵
柱(zhu)子，請增加消化時(shi)間。 4、再(zai)加入200ul無(wu)(wu)水乙(yi)醇(chun)，充分(fen)混勻(yun)，此時(shi)可能(neng)會出現絮狀(zhuang)沉(chen)淀(dian)，不影響DNA的(de)(de)提取(qu)，將(jiang)(jiang)(jiang)溶液(ye)(ye)和絮狀(zhuang)沉(chen)淀(dian)都(dou)加入吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)中(zhong)(zhong)(zhong)，放(fang)置(zhi)2分(fen)鐘。 5、12000rpm離心(xin)1min，棄(qi)廢液(ye)(ye)，將(jiang)(jiang)(jiang)吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)放(fang)入收(shou)集管中(zhong)(zhong)(zhong)。 6、向吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)中(zhong)(zhong)(zhong)加入700ul漂洗液(ye)(ye)(使用前請先檢(jian)查是否已加入無(wu)(wu)水乙(yi)醇(chun))，12000rpm離心(xin)1min，棄(qi)廢液(ye)(ye)，將(jiang)(jiang)(jiang)吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)放(fang)入收(shou)集管中(zhong)(zhong)(zhong)。 7、向吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)中(zhong)(zhong)(zhong)加入500ul漂洗液(ye)(ye)，12000rpm離心(xin)1min，棄(qi)廢液(ye)(ye)，將(jiang)(jiang)(jiang)吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)放(fang)入收(shou)集管中(zhong)(zhong)(zhong)。 8、12000rpm離心(xin)2min，將(jiang)(jiang)(jiang)吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)置(zhi)于室(shi)溫或50℃溫箱放(fang)置(zhi)數分(fen)鐘，目(mu)的(de)(de)是將(jiang)(jiang)(jiang)吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)中(zhong)(zhong)(zhong)殘(can)余(yu)的(de)(de)漂洗液(ye)(ye)去(qu)除，否則漂洗液(ye)(ye)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)乙(yi)醇(chun)會影響后續的(de)(de)實(shi)驗如酶切、PCR等。 9、將(jiang)(jiang)(jiang)吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)放(fang)入一個(ge)干凈(jing)的(de)(de)離心(xin)管中(zhong)(zhong)(zhong)，向吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)膜中(zhong)(zhong)(zhong)央懸空滴加50-200ul經65℃水浴(yu)預熱的(de)(de)洗脫液(ye)(ye)，室(shi)溫放(fang)置(zhi)5min，12000rpm離心(xin)1min。 10、離心(xin)所得(de)洗脫液(ye)(ye)再(zai)加入吸(xi)(xi)(xi)(xi)附(fu)(fu)(fu)柱(zhu)中(zhong)(zhong)(zhong)，室(shi)溫放(fang)置(zhi)2min，12000rpm離心(xin)2min，即可得(de)到高質量(liang)的(de)(de)基因(yin)組(zu)DNA。

solarbio-真菌基因組DNA提取試劑盒
注(zhu)意事項： 1. 由于(yu)真菌種類萬千，對(dui)于(yu)一些(xie)特(te)別難處理(li)的(de)(de)(de)真菌，可用(yong)(yong)(yong)液氮研磨，再用(yong)(yong)(yong)玻璃(li)珠(zhu)振蕩，蛋白酶K處理(li)，一般都(dou)(dou)(dou)可以(yi)(yi)得(de)到(dao)一定(ding)量(liang)的(de)(de)(de)基(ji)因(yin)組DNA，如電泳檢(jian)測很弱(ruo)，一般PCR都(dou)(dou)(dou)會(hui)有(you)較好(hao)結果(guo)。 2. 若(ruo)溶(rong)液A或溶(rong)液B中有(you)沉淀，可在(zai)(zai)55℃水(shui)浴中重(zhong)新溶(rong)解。 3. 如果(guo)DNA提(ti)取(qu)量(liang)很少(shao)(shao)，可加長玻璃(li)珠(zhu)處理(li)時間，如果(guo)提(ti)取(qu)DNA成彌散短(duan)條(tiao)帶，可減少(shao)(shao)玻璃(li)珠(zhu)處理(li)時間。 4. 洗(xi)脫(tuo)緩沖液的(de)(de)(de)體積好(hao)不(bu)少(shao)(shao)于(yu)50ul，體積過(guo)(guo)小會(hui)影(ying)(ying)響回收(shou)(shou)效(xiao)率；洗(xi)脫(tuo)液的(de)(de)(de)pH值(zhi)(zhi)對(dui)洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率也有(you)影(ying)(ying)響，若(ruo)需要(yao)用(yong)(yong)(yong)水(shui)做(zuo)洗(xi)脫(tuo)液應(ying)(ying)保(bao)證其(qi)pH值(zhi)(zhi)在(zai)(zai)8.0左右(可用(yong)(yong)(yong)NaOH將水(shui)的(de)(de)(de)pH值(zhi)(zhi)調此(ci)范圍)，pH值(zhi)(zhi)低(di)于(yu)7.0會(hui)降低(di)洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率；DNA產物應(ying)(ying)保(bao)存在(zai)(zai)-20℃，以(yi)(yi)防DNA降解。 5. DNA濃度(du)(du)及(ji)純(chun)度(du)(du)檢(jian)測：得(de)到(dao)的(de)(de)(de)基(ji)因(yin)組DNA片段的(de)(de)(de)大小與樣品(pin)保(bao)存時間、操作(zuo)過(guo)(guo)程中的(de)(de)(de)剪切力(li)等因(yin)素有(you)關。回收(shou)(shou)得(de)到(dao)的(de)(de)(de)DNA段可用(yong)(yong)(yong)瓊脂糖(tang)凝膠電泳和(he)紫外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)(du)計檢(jian)測濃度(du)(du)與純(chun)度(du)(du)。DNA應(ying)(ying)在(zai)(zai)OD260處有(you)顯(xian)著吸(xi)收(shou)(shou)峰，OD260值(zhi)(zhi)為1相當于(yu)大約50 μg/ml雙鏈(lian)DNA、40 μg/ml單鏈(lian)DNA。OD260/OD280比值(zhi)(zhi)應(ying)(ying)為1.7-1.9，如果(guo)洗(xi)脫(tuo)時不(bu)使(shi)用(yong)(yong)(yong)洗(xi)脫(tuo)緩沖液，而使(shi)用(yong)(yong)(yong)去(qu)離子水(shui)，比值(zhi)(zhi)會(hui)偏低(di)，因(yin)為pH值(zhi)(zhi)和(he)離子存在(zai)(zai)會(hui)影(ying)(ying)響光(guang)吸(xi)收(shou)(shou)值(zhi)(zhi)，但并不(bu)表示純(chun)度(du)(du)低(di)。 6. 在(zai)(zai)確保(bao)樣品(pin)無誤的(de)(de)(de)情況(kuang)下，如經過(guo)(guo)多次試驗，都(dou)(dou)(dou)無法提(ti)出DNA，請將部分(fen)樣品(pin)寄我(wo)公司，我(wo)們代為摸(mo)索優化條(tiao)件，以(yi)(yi)使(shi)您的(de)(de)(de)實驗能夠(gou)正常進(jin)行下去(qu)。

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