国产品无码一区二区三区在线蜜桃_人妻精品久久久久中文字幕_av无码免费一区二区三区_久久久久av无码免费网

AO熒光染色試劑盒

產品內容：

產品說明：

AO屬于(yu)三環雜芳香燃(ran)料(liao)，可以標記DNA、RNA，屬于(yu)異(yi)染性(xing)(xing)熒光(guang)(guang)(guang)染料(liao)。該染料(liao)具有膜通(tong)透性(xing)(xing)，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色(se)(se)。因(yin)此AO常用于(yu)細胞內DNA和RNA進行檢測(ce)。AO與(yu)核酸結(jie)(jie)(jie)合(he)方(fang)式(shi)主(zhu)要(yao)有：1、插(cha)入(ru)性(xing)(xing)結(jie)(jie)(jie)合(he)，AO嵌入(ru)核酸雙鏈(lian)(lian)的堿基對(dui)之間(jian)，這種(zhong)結(jie)(jie)(jie)合(he)方(fang)式(shi)主(zhu)要(yao)為AO與(yu)DNA的結(jie)(jie)(jie)合(he)，其熒光(guang)(guang)(guang)發射(she)峰(feng)為530nm，激發后(hou)呈(cheng)綠(lv)色(se)(se)熒光(guang)(guang)(guang)；2、靜電吸引，帶(dai)正電荷的AO與(yu)單鏈(lian)(lian)核酸的磷(lin)酸根(帶(dai)負電荷)產生靜電間(jian)的吸引結(jie)(jie)(jie)合(he)，這種(zhong)結(jie)(jie)(jie)合(he)方(fang)式(shi)主(zhu)要(yao)為AO與(yu)RNA的結(jie)(jie)(jie)合(he)，其熒光(guang)(guang)(guang)發射(she)峰(feng)為640nm，激發后(hou)呈(cheng)紅色(se)(se)熒光(guang)(guang)(guang)，少量(liang)結(jie)(jie)(jie)合(he)會(hui)呈(cheng)桔(jie)黃色(se)(se)或桔(jie)紅色(se)(se)熒光(guang)(guang)(guang)。因(yin)此，AO嵌合(he)到雙鏈(lian)(lian)DNA分子中顯(xian)綠(lv)色(se)(se)，與(yu)DNA單鏈(lian)(lian)或RNA結(jie)(jie)(jie)合(he)時發桔(jie)黃色(se)(se)或橙紅色(se)(se)熒光(guang)(guang)(guang)。

AO熒光(guang)染色試劑盒(he)(AO Detection Kit)主要由(you)AO Stain、AO Stain Buffer組成(cheng)，常用(yong)于細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)凋(diao)(diao)亡的檢測(ce)。染(ran)色(se)(se)后在熒(ying)光顯微(wei)鏡下觀察，AO可(ke)(ke)透過正(zheng)常細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜，使細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)核呈綠(lv)色(se)(se)或黃綠(lv)色(se)(se)均勻熒(ying)光；而(er)在凋(diao)(diao)亡細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)中，因染(ran)色(se)(se)質(zhi)固縮或斷裂為大小不等(deng)的片斷，形成(cheng)凋(diao)(diao)亡小體。AO使其染(ran)上致密濃(nong)染(ran)的黃綠(lv)色(se)(se)熒(ying)光或黃綠(lv)色(se)(se)碎片顆(ke)粒(li)；而(er)壞(huai)死(si)(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)黃熒(ying)光減弱(ruo)甚至消失(shi)。AO染(ran)色(se)(se)常與EB染(ran)色(se)(se)合(he)用(yong)雙染(ran)，EB只染(ran)死(si)(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)使之產生桔黃色(se)(se)熒(ying)光，由(you)此可(ke)(ke)區分(fen)出正(zheng)常細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)、凋(diao)(diao)亡細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)及壞(huai)死(si)(si)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。

自備材料：

        熒光顯微鏡， 低速離心機，PBS，細胞計數板， 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

(一) AO單獨染色

1、 收集細胞(采用流式細胞儀檢測時，應先固定細胞)，用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次，加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞，計數并調節細胞濃度至10⁶/ml。

2、 取適量的細胞(bao)懸液(ye)和AO Stain，按(an)照細胞(bao)懸液(ye)：AO Stain=19：1的比例混合，輕輕混勻。如(ru)果采(cai)用熒(ying)光(guang)顯微鏡下觀察(cha)，一般取95μl細胞(bao)懸液(ye)和5μl AO Stain混合即可。

3、 室溫(wen)避(bi)光染色(se)15min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分(fen)析。

4、 熒光顯(xian)微鏡下觀察(激發(fa)濾(lv)光片波長488nm，阻斷濾(lv)光片波長515nm)，計數(shu)并(bing)拍(pai)照(zhao)。

染色結果：

(二) AO/EB雙染色

1、 收集細胞，用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次，加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞，計數并調節細胞濃度至10⁶/ml。

2、 取(qu)適量(liang)的細胞(bao)懸(xuan)液和AO Stain，按照細胞(bao)懸(xuan)液：AO Stain=19：1的比例混(hun)合，并加入適量(liang)EB染色液，輕輕混(hun)勻(yun)。如果采用熒光顯微鏡下觀察，一般(ban)取(qu)95μl細胞(bao)懸(xuan)液和5μl AO Stain混(hun)合即可。

3、 室(shi)溫避光染色(se)15min，滴加于載玻片上(shang)并加蓋玻片

4、 熒光顯微鏡濾(lv)光片515nm觀察，計數并(bing)拍照。

染色結果(guo)：

計算細胞凋亡率和死亡率:

細(xi)胞死亡(wang)率=凋亡(wang)細(xi)胞/細(xi)胞總數(shu)×100%   細(xi)胞壞死率=壞死細(xi)胞/細(xi)胞總數(shu)×100%

注意事項：

      1． AO染色常不EB染色合(he)用(yong)，可區分出正常細(xi)胞、凋亡細(xi)胞及壞(huai)死細(xi)胞。

      2． 如有低溫離心(xin)機進行離心(xin)效果(guo)更佳，同時應(ying)注意(yi)減少試劑暴露于(yu)強(qiang)光下的時間。

      3． 為了您的安全(quan)和(he)健康，請穿實(shi)驗(yan)服(fu)并(bing)戴一次性手套操作。