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說明：熒光色素；用于DNA、染色體和核酸的染色；熒光染色法和免疫熒光技術。Hoechst 33258 是一種可以(yi)穿透細胞膜(mo)的藍色(se)熒光染(ran)料，它在嵌入(ru)雙鏈 DNA 后釋放強烈的藍色熒光，對(dui)細胞(bao)的毒性(xing)較低。Hoechst 33258 常用于(yu)細胞凋亡檢(jian)測(ce)，染色后用熒光(guang)顯微鏡觀察(cha)或流式細胞儀檢(jian)測(ce)，也可以用于(yu)普通的細胞核染色，或常規的DNA染色(se)。

物理性狀：黃(huang)(huang)色深黃(huang)(huang)色粉末；溶(rong)于水，黃(huang)(huang)或棕色溶(rong)液，參考濃度(du)為9.80 - 10.20 mg/ml；熔點＞300℃。

用途：細胞(bao)遺傳學研究的(de)常(chang)用(yong)試(shi)劑，熒(ying)光(guang)染(ran)色細胞(bao)的(de)DNA ，插(cha)入(ru)DNA的(de)A-T區，具有低的(de)細胞(bao)毒性，形(xing)成(cheng)膜滲(shen)透性熒(ying)光(guang)DNA鏈。

用于(yu)細胞核染色時，推(tui)薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

熒光染料 Hoechst 33258

別名：2'-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)- 2,5'-bi(1H-benzimidazole) trihydrochloride;2-[2- (4-Hydroxyphenyl)-6-benzimidazoyl]-6-(1-methyl-4- piperazyl)benzimidazole trihydrochloride;HOE 33258； Hoechst 33258

配制母液

Hoechst 33258溶于(yu)水(shui)，溶解度可達(da)10mg/ml。因此可配制成10mg/ml的(de)母液于(yu)4℃避光保存。

注意事項

1) Hoechst 33258 對人(ren)體有一定刺(ci)激性(xing)，請注意適(shi)當防護(hu)。

2) 熒(ying)光(guang)染料(liao)都存(cun)在(zai)淬(cui)滅的問題，建議(yi)染色后(hou)盡量當天完成檢(jian)測。

3) 為減緩熒光(guang)淬(cui)滅可以使用抗熒光(guang)淬(cui)滅封片液。

4) 為(wei)了您的安全和健康，請穿實驗(yan)服并(bing)戴(dai)一(yi)次性手套操作。

使用方法

1.   用(yong)PBS或(huo)合適(shi)的緩沖液(ye)制(zhi)備10～50µM Hoechst 33258染色液(ye)。

2.   固定的細胞或組(zu)織(zhi)染色：

對(dui)于固定(ding)的細(xi)胞或組織樣品，固定(ding)后，適當洗滌去(qu)除(chu)固定(ding)劑(ji)。隨后如(ru)果(guo)需要(yao)進行(xing)免(mian)疫熒光染(ran)色(se)(se)(se)，則行(xing)免(mian)疫熒光染(ran)色(se)(se)(se)，染(ran)色(se)(se)(se)完畢后再按后續步(bu)驟進行(xing)Hoechst33258染(ran)色(se)(se)(se)。如(ru)果(guo)不需要(yao)進行(xing)其它染(ran)色(se)(se)(se)，則直(zhi)接進行(xing)后續的Hoechst 33258染(ran)色(se)(se)(se)。

a) 對于貼壁細(xi)胞或組織切片(pian)：加入適量Hoechst 33258染(ran)色液(ye)，覆(fu)蓋(gai)住(zhu)樣品即可。對于懸浮細(xi)胞：少加入待測染(ran)色樣品體積3倍的(de)染(ran)色液(ye)，混勻。室溫放置3-5分鐘(zhong)。

b)  吸除Hoechst 33258染(ran)色液，用TBST、PBS或生理鹽水(shui)洗滌2-3次(ci)，每次(ci)3-5分鐘。

c) 直接在熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)(xia)觀察或封片(pian)后熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)(xia)觀察。激(ji)發波長350nm，發射波長460nm。

3.  活細胞(bao)或(huo)組織染色(se)：

a) 細胞培養物中加入適(shi)量Hoechst 33258染(ran)(ran)色(se)(se)(se)液(ye)，約1/10細胞培養基體積(ji)，必須充分覆蓋住待染(ran)(ran)色(se)(se)(se)的(de)樣品。通常對于六孔板(ban)一(yi)(yi)個孔需加入1ml染(ran)(ran)色(se)(se)(se)液(ye)，對于96孔板(ban)一(yi)(yi)個孔需加入100μl染(ran)(ran)色(se)(se)(se)液(ye)。

b) 在 37℃培養細胞 10～20 分鐘。

c) 用(yong) PBS或合適的緩(huan)沖液洗細胞兩次。

d) 直接在熒光顯微鏡下觀察(cha)(cha)或封(feng)片后熒光顯微鏡下觀察(cha)(cha)。激(ji)發波長(chang)350nm，發射(she)波長(chang)460nm。

 相關文獻：

《Dioscin-6′-O-acetate inhibits lung cancer cell proliferation via inducing cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis》 作者:XuejiaoLiaZhuoQubSongsongJingcXiaLiaChengchengZhaoaShuliMandYingWangeWenyuanGaoac 期刊:Phytomedicine 影響因子:3.61 PMID:30668391
《Protective effect of 17β-estradiol on hydrogen peroxide induced apoptosis of rat nucleus pulposus cells》 作者:Sheng-Hua Ning, Si-Dong Yang, Xu Zhang, Huan-Liu, Hai-Kun Wei, Hai-Ying Wang, Da-Long Yang, Wen-Yuan Ding 期刊:CLINICAL 影響因子:0.848 PMID:
《Protein kinase Cα inhibits myocardin-induced cardiomyocyte hypertrophy through the promotion of myocardin phosphorylation》 作者:Weizong Li,  Nan Wang,  Man Li,  Huiqin Gong,  Xinghua Liao, Xiaolong Yang , Tongcun Zhang 期刊:Acta Biochimica et Biophysica Sinica 影響因子:1.807 PMID:26206583
《Ethyl Pyruvate Attenuates CaCl2-Induced Tubular Epithelial Cell Injury by Inhibiting Autophagy and Inflammatory Responses》 作者:Zhao J， Cheng J， Li C， Xu M，Ma C， Qin L， Yi K， Liao N 期刊:kidney blood pressure research 影響因子:2.123 PMID:30352436
 

熒光染料 Hoechst 33258