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核蛋白提取試劑盒
本核蛋白提取試劑盒提(ti)供了一(yi)種(zhong)簡(jian)單、方便的從培養細(xi)(xi)胞或新(xin)鮮組織(zhi)中抽提(ti)核蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的方法。整個過程只需約(yue)60分(fen)鐘就(jiu)可以將核蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)和漿蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)從細(xi)(xi)胞中分(fen)離(li)出(chu)來(lai)。得到(dao)的蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)可以用于Western blot等實驗。本(ben)試劑盒通過漿蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)抽提(ti)試劑使細(xi)(xi)胞膨脹破裂，釋放出(chu)胞漿蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)，再通過離(li)心(xin)得到(dao)細(xi)(xi)胞核。然(ran)后通過核蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)抽提(ti)試劑抽提(ti)得到(dao)細(xi)(xi)胞核蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。本(ben)試劑盒可以抽提(ti)50/100個樣(yang)品。

核蛋白抽提試劑盒

對于體外培養細胞：
1．根據用量取適當的漿蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF
需現用現加，若目標蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 終濃度 0.5mM。
2．對于貼壁細胞，去除培養液，用 PBS 洗一遍，收集細胞，或用 EDTA 消化后吹打下細胞（好不用胰酶硝化，以免過度消化蛋白）。500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清留下沉淀備用。
3．對于懸浮細胞：用 PBS 洗一遍，500 g 離心 2～3 分鐘收集細胞，吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
4．按照每 20ul 細胞沉淀加入 200ul 漿蛋白抽提試劑的比例加入裂解液。
5．高速劇烈渦旋 15 秒，使細胞*分散開。若沉淀沒有*分散，可以適當延長渦旋時間。
6．500 g 離心 2～3 分鐘，去上清。
7．加入漿蛋白抽提試劑 200ul，高速劇烈渦旋 5 秒，冰浴 10 分鐘。
8．高速劇烈渦旋 5 秒，4℃12000～16000g 離心 10 分鐘。
9．上清即為抽提得到的細胞漿蛋白。可進行后續的 PAGE、Western，但蛋白濃度很低，可能需要濃縮。
10．*吸盡殘余的上清，避免細胞漿蛋白污染，加入 100ul 核蛋白抽提試劑。
11．高速渦旋 15 秒或用移液器吹打*分散,放回冰浴中 5 分鐘，4℃12000～16000g 離心 10 分鐘。
12．立即(ji)吸取(qu)上清預(yu)冷的樣品管(guan)中，此(ci)即(ji)為抽提得(de)到的細胞(bao)核蛋白。可進行后續實驗或(huo)-70℃凍(dong)存。

對于組織樣品：
把組織(zhi)稱重后，盡(jin)可(ke)能切成非常細(xi)小的碎片，按每 50mg 組織(zhi)加入 200ul-500ul PBS，用勻漿器冰上勻漿勻漿制成細(xi)胞懸液(ye)，500 g 離心 2～3 分鐘收(shou)集(ji)細(xi)胞，吸盡(jin)上清，收(shou)集(ji)沉淀。加入 200ul 漿蛋(dan)白抽提試劑(ji)后接上述步驟 5

參考文獻：
《Lactobacillus plantarum NA136 improves the non-alcoholic fatty liver disease by modulating the AMPK/Nrf2 pathway》 作者:Zijian Zhao，Chao Wang ，Li Zhang，Yujuan Zhao，Cuicui Duan，Xue Zhang，Lei Gao，Shengyu Li 期刊:Applied microbial and cell physiology 影響因子:3.67 PMID:31115630
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652