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產品介紹：
尿嘧(mi)啶(ding)DNA糖(tang)苷(gan)酶(mei)（UNG）來源于大腸(chang)桿菌重組克隆(long)表達，分子量為(wei)25kDa，可催化含尿嘧(mi)啶(ding)的單鏈和雙鏈DNA釋放游離(li)尿嘧(mi)啶(ding)。UNG酶(mei)對RNA無活性(xing)，主要應用于PCR擴(kuo)增產(chan)物的防污染。其作用原理基(ji)于：如果(guo)在PCR反應中以dUTP替代dTTP摻入(ru)DNA中，形成了(le)含dU堿基(ji)的PCR擴(kuo)增產(chan)物，該(gai)酶(mei)能選(xuan)擇性(xing)斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基(ji)的糖(tang)苷(gan)鍵，降解該(gai)PCR擴(kuo)增產(chan)物。

規格：1U/μl

儲(chu)存緩沖液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，150mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.05% Tween20，50%glycerol.

試(shi)劑組成：

10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，100mM NaCl，10mM EDTA，1mg/ml BSA.

活(huo)性定義(yi)：
37℃條件(jian)下(xia)，1小時(shi)降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。

保存條(tiao)件：
每(mei)天(tian)或(huo)每(mei)周使(shi)用保存(cun)(cun)于-20℃。長期儲(chu)存(cun)(cun)應(ying)保存(cun)(cun)于-70℃保存(cun)(cun)，并(bing)嚴格避免-70℃保存(cun)(cun)時反復凍融。

質量控(kong)制：

1、SDS-PAGE電(dian)泳純度大于(yu)98%；

2、1U UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷(kao)貝以下含U模版應*降(jiang)解(jie)，不能產生擴增產物(wu)。

3、無核酸外切酶和(he)核酸內(nei)切酶活性、RNase酶活性；

（1）SDS-PAGE 銀(yin)染純度(du)大于98%

（2）UNG 酶(mei)消(xiao)化能(neng)力試(shi)驗

    以700bp含dUTP的(de)不(bu)同拷貝數基因片段為模(mo)板，分(fen)別加入含0.5U UNG酶(mei)的(de)50μl PCR反應體(ti)系(xi)，50℃ 消化2min，94℃ 滅(mie)活4min后(hou)進行PCR擴(kuo)增(zeng)反(fan)應。

A. Biori UNG

B. Promega UNG

Lane 1：Negative control （no template）；

Lane 2：positive control（no UNG）；

Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template 

結果表明，我們的(de)UNG酶與Promega UNG酶消化(hua)效果相當，均可以有(you)效控制108拷貝(bei)以下含有U-DNA的模板(ban)的污染。

（3）UNG酶(mei)穩(wen)定性(xing)實驗

將UNG酶(mei)置于(yu)37℃進行(xing)7天加(jia)速試驗(yan)。以含dUTP的（106、107、108、109 copies/ml）基因為模板，采用含dUTP的體(ti)系進(jin)行PCR擴增(zeng)，50μl反應(ying)體系加入(ru)0.5U UNG酶，于50℃消化2min，94℃滅(mie)活(huo)4min；然后進行PCR擴增(zeng)反應。以Promega公司UNG酶(mei)為對照，考(kao)察(cha)UNG酶(mei)對(dui)模板(ban)的消化效(xiao)果。

1：negative（No template）； 

2～9：postive （104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml， No UNG）；

10～14：control Promega UNG（106、107、108、109、1010 copies /ml）；

15～19：Sample UNG（106、107、108、109、1010 copies/ml）。

1～4：Sample UNG（106、107、108、109 copies/ml）；

5～8：Control Promega UNG（106、107、108、109 copies/ml）； 

9：negative （No template）；

10～13：Postive （106、107、108、109 copies/ml，No UNG）。

結果表明，我(wo)們的UNG酶與Promega UNG酶穩定性相當，均(jun)可以在37℃加速7天(tian)，仍保(bao)持對(dui)107copies/ml含dUTP模板的消(xiao)除能力。

反應(ying)條(tiao)件：

1、Incubate the product for 2 min at 50℃；

2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.

注意事項：
1、避免多次凍融，切勿(wu)暴露(lu)在溫度波(bo)動(dong)較大之處。溫度波(bo)動(dong)對產品的穩定性有極大影響(xiang)。

2、尿嘧啶DNA糖基酶(mei)可以(yi)在PCR反應前清除不慎污染(ran)的U-DNA分(fen)子。為有效防止污染，一個實驗室(shi)必須(xu)在所有的PCR反應中(zhong)均使用(yong)dUTP作(zuo)為dNTPs組分(fen)之一(yi)進(jin)行擴增(zeng)，使所有擴增(zeng)產物都成(cheng)為U-DNA。

3、由于不同基(ji)因(yin)堿基(ji)組成不同，因(yin)此有些(xie)基(ji)因(yin)對UNG酶殘留活性十分敏(min)感，如發(fa)現使用(yong)UNG 酶影響擴增靈(ling)敏度，可以嘗試降低UNG酶(mei)的(de)用量或(huo)對反應體系中dTTP與dUTP的比例進行(xing)調整。推薦使用我公司生產的TS-UNG，該酶滅活更加*，可(ke)以大大簡化上述試驗過程。