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ATP含量檢測試劑盒 微量法

ATP 含(han)量檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)說明書
微量法

產地：北京市通州區(qu)馬(ma)駒橋聯東U谷8三樓(lou)
英文名稱:ATP content detection kit
產品商標：solarbio
注意：正式測定前務(wu)必取2-3 個預期差異較大的(de)樣(yang)本做預測定。
貨號：BC0305
規格(ge)：100T/96S
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；           ; 
參考價格：1560
庫存狀態：現貨
關鍵詞：ATP含量檢測|ATP含量|ATP|

產品內容(rong)：
提取液：液體100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一(yi)：液(ye)體(ti)20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二(er)：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨(lin)用前加(jia)(jia)入3.5mL 蒸餾水充分溶(rong)解，可加(jia)(jia)熱促進溶(rong)解；
試劑三：液體4mL×1 瓶，4℃保存；
試(shi)劑(ji)(ji)四：粉劑(ji)(ji)×1 支(zhi)，-20℃保存。臨用前每支(zhi)加入0.4mL 蒸餾水(shui)溶(rong)解，可分裝后-20℃保存，避免反復凍融；
試(shi)劑五(wu)：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前(qian)加入1mL 蒸餾(liu)水；
試劑六：粉(fen)劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入(ru)0.5mL 蒸餾水備用，可分裝后(hou)-20℃保存，避免反復凍融；
標(biao)準品：粉(fen)劑×1 支，-20℃保存。5mg ATP，臨用前加入(ru)0.826mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的ATP標準溶(rong)液(ye)。

產品說明：
ATP 廣泛(fan)存(cun)在于動物、植物、微生物和培養(yang)細胞中，是生物能量通貨，能荷是描述(shu)細胞能量代謝(xie)狀(zhuang)態的(de)主(zhu)要參數。測定(ding)ATP 含量并且計(ji)算能荷，能夠反映能量代謝(xie)狀(zhuang)態。
HK 催化(hua)(hua)葡(pu)萄(tao)糖(tang)(tang)和ATP 合成(cheng)6-磷(lin)(lin)酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖(tang)(tang)，6-磷(lin)(lin)酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖(tang)(tang)脫氫酶進(jin)一步催化(hua)(hua)6-磷(lin)(lin)酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖(tang)(tang)脫氫生成(cheng)NADPH，NADPH 在(zai)340nm 有(you)特征吸(xi)收峰，NADPH 和ATP 含(han)量成(cheng)正(zheng)比，以此反應ATP 含(han)量。

自備儀(yi)器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水(shui)(shui)浴鍋(guo)、可調式移液槍、微量(liang)石英比色皿/ 96 孔UV 板、研缽/勻漿(jiang)器、蒸餾水(shui)(shui)和lv仿。

操作步(bu)驟：
一(yi)、ATP 的(de)提取：
1、血清（漿(jiang)）中ATP 的(de)提(ti)取(qu)：按照血清（漿(jiang)）體(ti)積（mL）：提(ti)取(qu)液體(ti)積（mL）為1：5~10 的(de)比例（建議取(qu)約0.1mL 血清（漿(jiang)），加(jia)入(ru)1mL 提(ti)取(qu)液），充分震蕩，10000g，4℃離心10min；取(qu)上清液另一EP 管中，加(jia)入(ru)500μL 的(de)lv仿充分震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，10000g 4℃離心3min，取上清，置冰上待測（不可用于(yu)蛋白質含量測定(ding)）。

2、組織中ATP 的提取(qu)：按照組織質(zhi)量（g）：提取(qu)液體積(mL)為1：5~10 的比例（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約(yue)0.1g組織，加(jia)(jia)入(ru)1mL 提取(qu)液），進行冰浴(yu)勻漿，8000g 4℃離心(xin)10min，取(qu)上(shang)清(qing)另(ling)一EP 管中，加(jia)(jia)入(ru)500μL 的lv仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取(qu)上清，置冰上待測（不(bu)可用于蛋白質(zhi)含量測定）。
3、細(xi)胞或(huo)細(xi)菌中(zhong)ATP 的(de)提取：先(xian)收集細(xi)胞或(huo)細(xi)菌到離心管內，棄上清，按照細(xi)菌或(huo)細(xi)胞數量（104個）：提取液(ye)體(ti)積（mL）為500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議500 萬細(xi)菌或(huo)細(xi)胞加(jia)入1mL 提取液(ye)），超(chao)聲波破碎(sui)1min（冰(bing)浴，強度20％或(huo)200W，超(chao)聲2s，停1s），10000g 4 ℃離心10min；取上清液(ye)另一(yi)EP 管中(zhong)，加(jia)入500μL 的(de)lv仿充(chong)分震(zhen)蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上清，置(zhi)冰上(shang)待(dai)測（不可(ke)用于蛋白質含量測定）。

二、測定(ding)步驟：
1、紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度計/酶標(biao)儀預熱(re)30 min 以上，調(diao)節波長到(dao)340nm，蒸餾水調(diao)零。
2、將10μmol/mL 的ATP 標準溶(rong)液(ye)用蒸餾水稀(xi)釋16 倍即0.625 μmol/mL 標準溶(rong)液(ye)備用。
3、工作液的配(pei)制：臨用前請(qing)按試劑(ji)二(er)(mL)：試劑(ji)三(mL)：試劑(ji)四(mL)：試劑(ji)五（mL）：試劑(ji)六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1 的比例配(pei)制，現配(pei)現用。
4、加(jia)樣表
在微量石英比(bi)色皿或96 孔UV 板中加入：
試劑名稱(cheng)(μL)          測定管          標準管
樣(yang)本(ben)                   20
標準液                                 20
試劑一      ;          128             128
工作液                ; 52              52

充分混合后，立即測定340nm 下10s 的吸光值A1，然后將(jiang)比色(se)皿(min)連(lian)同反應液一起放入37℃（哺(bu)乳動物(wu)(wu)(wu)）或25℃（其他(ta)物(wu)(wu)(wu)種）水浴中反應3min，拿(na)出擦拭干凈(jing)立即測定其在3min10s 時的吸光值A2。用96 孔板則(ze)放入37℃（哺(bu)乳動物(wu)(wu)(wu)）或25℃（其他(ta)物(wu)(wu)(wu)種）培(pei)養箱中（酶(mei)標儀若自帶控溫(wen)功(gong)能，則(ze)將(jiang)溫(wen)度調(diao)37℃或25℃）。分(fen)別計算ΔA 測定=A2 測定管(guan)-A1 測定管(guan)，ΔA 標準=A2標準管-A1 標準管

三、ATP 含量計(ji)算：
1、血清（漿）中ATP 含量計算
ATP 含(han)量(μmol/mL) =ΔA 測(ce)定÷（ΔA 標(biao)準(zhun)÷C 標(biao)準(zhun)）×（V 提取+V 血清（漿））÷V 血清（漿）=6.875×ΔA 測(ce)定÷ΔA 標(biao)準(zhun)
2、組織、細菌(jun)或細胞中ATP 含(han)量計算
（1） 按(an)樣本鮮重計算
ATP 含量（μmol/g 鮮(xian)重）= ΔA 測(ce)定÷（ΔA 標準(zhun)÷C 標準(zhun)）×V 提取÷W=0.625×ΔA 測(ce)定÷ΔA 標準(zhun)÷W
（2） 按細菌或細胞密度計(ji)算
ATP 含量(μmol/106 cell）=ΔA 測定÷（ΔA 標準÷C 標準）×V 提(ti)取(qu)÷5=0.125×ΔA 測定÷ΔA 標準

C 標準(zhun)管：標準(zhun)液濃(nong)度，0.625μmol/mL；
V 提(ti)取(qu)：加入的提(ti)取(qu)液體積，1mL；
V 血(xue)清(qing)（血(xue)漿(jiang)(jiang)）：血(xue)清(qing)（漿(jiang)(jiang)）體積，0.1mL；
W：樣本質量，g；
5：細胞或(huo)細菌總(zong)數，5×106 個。

注(zhu)意事項(xiang)
1、加入提(ti)取液離心后的上清若為(wei)渾濁為(wei)正(zheng)常現象。
2、提取過程嚴格(ge)在(zai)冰浴條件下進(jin)行。
3、用微量(liang)石(shi)英比色(se)皿測(ce)量(liang)的吸光(guang)值(zhi)大于(yu)1.4 或(huo)者(zhe)ΔA 測(ce)定(ding)大于(yu)1.2 時（石(shi)英96 孔板的吸光(guang)值(zhi)大于(yu)1.4 或(huo)者(zhe)ΔA 測(ce)定(ding)大于(yu)1.2 時），可(ke)以將(jiang)樣品稀釋后(hou)進行(xing)測(ce)定(ding)。若吸光(guang)值(zhi)小于(yu)0.01，則可(ke)以增(zeng)加(jia)反(fan)應(ying)時間（5min 或(huo)10min）來測(ce)定(ding)，標準(zhun)品需要增(zeng)加(jia)同樣的反(fan)應(ying)時間。

相(xiang)關文獻(xian)：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang，Jianhang Jiao，Shanyong Zhang，Changjun Zheng，Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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