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        可溶性淀粉合成酶(SSS）測定試劑盒 微量法

測定(ding)意義：SSS（EC 2.4.1.21）通常以游離態存在于(yu)質(zhi)體基質(zhi)中，催(cui)化淀粉(fen)鏈延長，主要負責支(zhi)鏈淀粉(fen)的合成。

測定原理：SSS催化(hua)ADPG與淀粉引物(葡聚糖(tang))反應(ying)，將葡萄糖(tang)分子轉移到淀粉引物上，同時生(sheng)成ADP，在反應(ying)體系中添(tian)加的(de)丙(bing)酮酸(suan)(suan)激(ji)(ji)酶(mei)、己糖(tang)激(ji)(ji)酶(mei)和6-磷酸(suan)(suan)葡萄糖(tang)脫氫酶(mei)依次(ci)催化(hua)NADP+還原為NADPH，NADPH生(sheng)成量與前(qian)一步(bu)反應(ying)中ADP生(sheng)成量呈正(zheng)比，340nm下測定NADPH增加量即可(ke)計算SSS活性(xing)。

需要的(de)儀器，耗材:紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離(li)心(xin)機、可調式移液器、微量石英(ying)比色皿(min)/96孔板(ban)、研缽(bo)、冰和蒸餾水。

可溶性淀粉合成酶(SSS）測定試劑盒 微量法

試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)：液(ye)體×1 支(zhi)，-20℃保存(cun)(cun)(cun)；臨用(yong)前(qian)加(jia)入 250μL 蒸餾水，充分溶(rong)(rong)(rong)解備(bei)用(yong)，用(yong)不完的試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji) 4℃ 保存(cun)(cun)(cun)；試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)×1 支(zhi)，-20℃保存(cun)(cun)(cun)；臨用(yong)前(qian)加(jia)入 250μL 蒸餾水，充分溶(rong)(rong)(rong)解備(bei)用(yong)，用(yong)不完的試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji) 4℃ 保存(cun)(cun)(cun)；反(fan)應液(ye)Ⅰ的配制：臨用(yong)前(qian)取(qu)液(ye)體一(yi)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)和(he)粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)三(san)各一(yi)支(zhi)，依(yi)(yi)次(ci)把粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)一(yi)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)和(he)粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)三(san)轉(zhuan)移(yi)到(dao)液(ye)體一(yi)中混(hun)合(he)溶(rong)(rong)(rong)解。反(fan)應液(ye)Ⅱ的配制：臨用(yong)前(qian)取(qu)液(ye)體二(er)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)(si)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)五、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)六和(he)粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)七(qi)各一(yi)支(zhi)，依(yi)(yi)次(ci)把粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)四(si)(si)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)五、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)六和(he)粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)七(qi)轉(zhuan)移(yi)到(dao)液(ye)體二(er)中混(hun)合(he)溶(rong)(rong)(rong)解。反(fan)應液(ye)Ⅲ的配制：臨用(yong)前(qian)取(qu)液(ye)體三(san)、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)八、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)九和(he)粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)十(shi)各一(yi)支(zhi)，依(yi)(yi)次(ci)把粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)八、粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)九和(he)粉(fen)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)十(shi)轉(zhuan)移(yi)到(dao)液(ye)體三(san)中混(hun)合(he)溶(rong)(rong)(rong)解。

一、粗酶液(ye)(ye)制備(bei)按照(zhao)組織質量（g）：提取(qu)液(ye)(ye)體積(ji)(mL)為 1：5~10 的比例（建議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組織，加(jia)(jia)入 1mL 提取(qu)液(ye)(ye)），進行冰浴(yu)勻(yun)(yun)(yun)漿(jiang)。10000g 4℃離心(xin)(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測。二、測定步(bu)驟 1、分光光度計預熱(re) 30min 以上(shang)，調節波長 340nm，蒸餾水(shui)調零(ling)。 2、在 EP 管中(zhong)按順序(xu)加(jia)(jia)入下列(lie)試劑(ji)試劑(ji)名稱（μL） 測定管樣本 150 反應(ying)液(ye)(ye)Ⅰ 270 混(hun)勻(yun)(yun)(yun)，30℃保(bao)溫(wen) 20 min，置(zhi)沸水(shui)浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋緊，防止水(shui)分散失），冰浴(yu)冷(leng)卻反應(ying)液(ye)(ye)Ⅱ 150 混(hun)勻(yun)(yun)(yun)，30℃保(bao)溫(wen) 30 min，置(zhi)沸水(shui)浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋緊，防止水(shui)分散失），冰浴(yu)冷(leng)卻，10000g 25℃離心(xin)(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)(ye)上(shang)清(qing)液(ye)(ye) 450 反應(ying)液(ye)(ye)Ⅲ 300 試劑(ji)一 10 試劑(ji)二 10 混(hun)勻(yun)(yun)(yun)后立即在 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，計算ΔA=A2-A1。注意：反應(ying)液(ye)(ye)Ⅰ如有沉淀，加(jia)(jia)入之前(qian)要使(shi)之充分溶解混(hun)勻(yun)(yun)(yun)。