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瓊脂糖凝膠CL-2B

貨號：S8731

規格：10ml/100ml

一(yi)、瓊脂糖凝膠CL-2B簡(jian)介

瓊脂糖凝膠(jiao)CL-2B是在瓊脂糖凝膠2B的基礎上(shang)通過(guo)交聯使(shi)微球的剛性增強，理化(hua)性能提高，有利(li)用于工業(ye)生產。該介質用于生物大(da)分(fen)子的凝膠層析(xi)。

本品(pin)呈白(bai)色(se)球狀凝膠，無(wu)(wu)嗅、無(wu)(wu)味、無(wu)(wu)肉眼可見雜質(zhi)。

二、親和填料特性

*檢測條件： 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。

三、 適用范(fan)圍

本產品(pin)具有(you)很高(gao)的(de)化學穩定性、高(gao)流速、較好的(de)機械性能、可(ke)多(duo)次重復使(shi)用等特(te)點，非(fei)特(te)異性吸附低(di)，回收率高(gao)，可(ke)用有(you)機溶劑及(ji)1~2mol/L 的(de)NaOH在(zai)位清(qing)洗，適(shi)用于工業(ye)規模生(sheng)產，廣泛用于生(sheng)物制(zhi)藥和(he)生(sheng)物工程下游蛋白質、核酸及(ji)多(duo)肽的(de)凝膠色譜純化。

四、注意事(shi)項

產品應(ying)密封貯存在(zai)4℃~25℃（保(bao)存(cun)溶液為20% 乙醇(chun)），通風(feng)、干燥(zao)、清潔的地方。不(bu)能冷凍(dong)。

用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

本產品避免與氧(yang)化(hua)劑接觸；避免長(chang)時(shi)間暴露在空氣中。

保(bao)質期：5年。

五、操(cao)作步驟：

1、裝柱

凝膠過濾介(jie)質(zhi)的(de)使用(yong)(yong)對裝(zhuang)柱(zhu)的(de)要求較(jiao)高(gao)，為了保證分(fen)離(li)效果，一(yi)般通過柱(zhu)子上加一(yi)個裝(zhuang)柱(zhu)器來使分(fen)離(li)柱(zhu)裝(zhuang)滿凝膠，或(huo)采用(yong)(yong)帶有軸向加壓裝(zhuang)置的(de)柱(zhu)子。凝膠柱(zhu)床(chuang)一(yi)般高(gao)于60cm。裝(zhuang)柱(zhu)效果可(ke)用(yong)(yong)染(ran)料或(huo)丙酮-水溶(rong)液(ye)進行檢驗。

以下過(guo)(guo)程(cheng)為(wei)通用介質裝填過(guo)(guo)程(cheng)。若(ruo)為(wei)帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩定后將柱床壓緊，接好管路。

（1）讓(rang)所有的(de)材料和試劑達(da)到室溫。配制緩沖(chong)液。凝膠層(ceng)析上樣、平衡和洗脫(tuo)只用一(yi)種低鹽濃(nong)度的(de)緩沖(chong)液。

   （2）選擇(ze)一根(gen)一定直徑的(de)柱子，長約30~60cm,根(gen)據柱子大小取所(suo)需量(liang)的(de)凝膠（約為柱床(chuang)體積的(de)1.15倍(bei)），清洗掉20%乙(yi)醇，抽干(gan)，用(yong)緩沖(chong)液（按凝膠：緩沖(chong)液=3：1的(de)比例）配成(cheng)勻(yun)漿。

（3）將(jiang)柱內及柱子底(di)端用水或緩沖(chong)液潤濕并保(bao)持一小段液位(wei)（液面(mian)略高于濾(lv)膜），務必使底(di)端無氣泡。

（4）用玻璃棒(bang)引(yin)導勻(yun)漿(jiang)沿著柱內(nei)壁一次(ci)性倒入柱內(nei)，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口(kou)，使凝膠在柱內(nei)自(zi)由沉降，連(lian)結(jie)好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕(ru)動(dong)泵，讓緩沖液(ye)用使用時流速的1.33倍(bei)的流速流過，使柱床穩定(ding)。用緩沖液(ye)平衡柱子，到柱床穩定(ding)。

（6）推(tui)薦用一個(ge)裝(zhuang)柱(zhu)器輔(fu)助裝(zhuang)柱(zhu)。裝(zhuang)完后柱(zhu)床上端輕(qing)輕(qing)刮平(ping)，上好柱(zhu)頭。

2、平衡

讓(rang)緩(huan)沖液以一定流(liu)速流(liu)過柱子，到流(liu)出液電導和pH不變(bian)。

3、上樣

（1）樣(yang)品(pin)用緩沖液(ye)配制(zhi)，渾濁的(de)樣(yang)品(pin)要(yao)(yao)離(li)心和過(guo)濾后上樣(yang)。含鹽量過(guo)大、濃度(du)過(guo)小的(de)樣(yang)品(pin)要(yao)(yao)先做(zuo)處理，再上樣(yang)。

（2）介質(zhi)對樣品組分(fen)的分(fen)離是按(an)組分(fen)分(fen)子(zi)量(liang)大小進(jin)行(xing)的，分(fen)子(zi)量(liang)大的先流出來。

（3）上樣(yang)體積約為柱體積的1~2%，越(yue)小分(fen)離越(yue)好(hao)。

4、洗脫

用(yong)緩(huan)沖液(ye)洗脫，洗脫中保持流速(su)、緩(huan)沖液(ye)組成(cheng)不變。

5、再生

一般用緩(huan)沖液(ye)洗到平(ping)衡，可再次使用。

6、在位清洗

（1）對(dui)于以(yi)(yi)離(li)子鍵結合上(shang)去(qu)的蛋白，可以(yi)(yi)用2M Nacl去(qu)除。

（2）對(dui)沉淀蛋(dan)白(bai)、對(dui)以疏水性結合的蛋(dan)白(bai)或脂類，可用1M NaOH 去除(chu)。

（3）對(dui)強疏水性結(jie)合(he)的(de)蛋白、脂類等(deng)，用4~10倍柱(zhu)體(ti)積的(de)70%乙醇(chun)或30%異丙醇(chun)清洗，但要注意有機(ji)溶劑的(de)濃度(du)以梯度(du)的(de)方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。

清洗完畢(bi)后，用少3倍緩沖液平衡柱子。

7、注意

在裝柱(zhu)、使(shi)用(yong)和保存柱(zhu)子的(de)時候，要避免柱(zhu)子流干，氣泡(pao)進入。

8、去熱(re)源

用(yong)0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用(yong)0.1M的氫氧化鈉24小時。或用(yong)以下方法步驟去除：

（1）2倍柱(zhu)體積(ji)的70%乙醇(chun)；

（2）2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱(zhu)體(ti)積(ji)的Tris緩沖(chong)液+0.1M Nacl；

以上(shang)緩沖液都在無熱(re)源的雙蒸水中配制。

9、 消毒(du)

用0.5~1M NaOH室溫下(xia)洗8~10倍柱(zhu)體積，初始(shi)緩(huan)沖液平衡柱(zhu)子。