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說明：分離(li)試劑，層析(xi)介(jie)質。

葡聚糖凝膠G-100

化學和物理性質:

葡(pu)聚糖(tang)(tang)凝膠是一種(zhong)珠狀(zhuang)的(de)凝膠，含(han)有大(da)量的(de)羥基(ji)，很容易在水(shui)中和電解質(zhi)溶(rong)(rong)液(ye)中溶(rong)(rong)脹。 G型的(de)葡(pu)聚糖(tang)(tang)凝膠有各種(zhong)不(bu)同的(de)交聯(lian)度(du)，因此它們的(de)溶(rong)(rong)脹度(du)和分級分離范圍也有所(suo)不(bu)同。 葡(pu)聚糖(tang)(tang)凝膠的(de)溶(rong)(rong)脹度(du)基(ji)本上不(bu)因鹽和洗滌劑(ji)的(de)存在而受影響。

葡聚糖凝(ning)(ning)膠有不(bu)同的(de)粒度。超細級(ji)(ji)的(de)葡聚糖凝(ning)(ning)膠是用于(yu)需要*分辨(bian)率的(de)柱色(se)譜(pu)和(he)薄層色(se)譜(pu)。粗(cu)級(ji)(ji)和(he)中(zhong)級(ji)(ji)的(de)凝(ning)(ning)膠用于(yu)制(zhi)備性(xing)色(se)譜(pu)過程，可(ke)在較(jiao)低的(de)壓力下獲得(de)較(jiao)高的(de)流速。 另外，粗(cu)級(ji)(ji)也可(ke)用于(yu)批量工(gong)藝。

化學穩定性:

葡聚糖凝膠不溶于一(yi)切(qie)溶劑(除非它被(bei)化(hua)學降解)。 它在水(shui)、鹽溶液(ye)、有機(ji)溶劑、堿和弱酸性溶液(ye)中都(dou)是穩(wen)定的(de)，在強酸中凝膠骨架的(de)糖昔鍵被(bei)水(shui)解。 長(chang)期接(jie)觸氧(yang)化(hua)劑將破壞凝膠，因(yin)而應避免使用。

物理穩定性:

葡聚糖(tang)疑膠(jiao)并不熔融，可以在(zai)濕態(tai)、中性PH進行滅菌或在(zai)高壓滅菌器(qi)120℃、30分鐘而不影響(xiang)它的色(se)譜性質。 干態(tai)的凝(ning)膠(jiao)加熱120℃以上將開始焦糖(tang)化(hua)。 葡聚糖(tang)凝(ning)膠(jiao)的機(ji)械強度(du)取決于交聯度(du)。

使用方法:

1. 葡聚糖凝膠預(yu)處(chu)理：

在室溫下，將葡聚糖(tang)凝(ning)膠干(gan)粉浸泡(pao)于蒸餾水中(zhong)少(shao)24小時，并(bing)不斷(duan)攪拌(ban)以(yi)保證凝(ning)膠溶(rong)脹，或者用熱水浸泡(pao)（不建議煮沸）少(shao)1小時直(zhi)充分溶(rong)脹，凝(ning)膠體積不再變化。

注：在(zai)溶脹前(qian)，加入蒸餾水攪拌后(hou)使其(qi)自然沉降(jiang)，沉降(jiang)后(hou)若(ruo)上層溶液中漂浮的凝膠碎(sui)片顆粒較多，需要重復(fu)多次漂洗將其(qi)除去(qu)，防(fang)止層析(xi)時阻塞凝膠柱，影(ying)響流速(su)。

2. 裝(zhuang)柱：

將溶脹好的(de)凝(ning)膠(jiao)根據裝柱(zhu)要求一次(ci)性置入(ru)柱(zhu)內(nei)，注意保(bao)持濕(shi)態裝柱(zhu)，并避免柱(zhu)內(nei)產(chan)生氣(qi)泡或斷(duan)層; 裝柱(zhu)要均勻，可(ke)在凝(ning)膠(jiao)耐受的(de)操作壓下裝柱(zhu)，裝好的(de)凝(ning)膠(jiao)柱(zhu)可(ke)以檢測(ce)柱(zhu)效(xiao)，檢測(ce)過(guo)濾柱(zhu)裝填是否合格。

凝膠(jiao)層(ceng)析(xi)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)度取決(jue)于柱高(gao)，為分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)不同(tong)組(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)，凝膠(jiao)柱床必(bi)須有適宜的高(gao)度：分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)級分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)時(shi)，一般需要 100cm 左(zuo)右(you)長的層(ceng)析(xi)柱，柱高(gao)與直徑(jing)之比(bi)為 20:1-100:1，柱高(gao)過(guo)高(gao)時(shi)，凝膠(jiao)擠壓變(bian)形阻塞會引起較大的反壓，應當(dang)盡(jin)可能避免(mian)；分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)組(zu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)離(li)（例如脫鹽）時(shi)用短柱，柱高(gao)控(kong)制在40-50cm 以下，柱高(gao)與直徑(jing)的比(bi)約為 5:1-10:1。

3. 平衡：

上樣前用平(ping)衡液(ye)平(ping)衡層析(xi)柱少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平(ping)穩為止（例如(ru)流出液(ye)的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

4. 上樣：

分級分離(li)時上樣(yang)量一般(ban)為5%的柱床(chuang)(chuang)體積(ji)，我們建議初次上樣(yang)控制(zhi)在(zai)1-2%的床(chuang)(chuang)體積(ji)，視分離(li)情(qing)況可以調整;脫(tuo)鹽時上樣(yang)量可以達到20%的柱床(chuang)(chuang)體積(ji)。

樣品溶液如有雜(za)質或(huo)沉(chen)淀應過濾(lv)或(huo)離心除去，樣品的(de)粘度不能過高(gao)，否則影響分離效(xiao)果。

5. 洗脫方法:

可以(yi)用無鹽(yan)水(shui)，也(ye)可以(yi)采用上柱時的緩(huan)沖液(ye)洗(xi)脫；在上柱緩(huan)沖液(ye)中加入NaCl等梯(ti)度(du)洗(xi)脫或鹽(yan)梯(ti)度(du)洗(xi)脫也(ye)可以(yi)*分離純化；

6. 在位清洗(CIP)

凝膠使用(yong)十次(ci)后作一次(ci)CIP，目(mu)的是去除柱(zhu)床內沉(chen)淀的及頑固殘(can)留的蛋白。 方法是以(yi)40cm/h用(yong)1M氫氧化鈉(na)反向(xiang)清洗四個柱(zhu)體積(ji)，再以(yi)少(shao)三個柱(zhu)體積(ji)平(ping)衡緩沖液再生。

7. 保存

凝膠柱暫時不(bu)用，可將其回收，一(yi)般方法是將凝膠用水沖洗(xi)干(gan)(gan)凈濾干(gan)(gan)，可加入0.02%防腐或用20%乙(yi)醇浸泡，以控制微生(sheng)物(wu)生(sheng)長。

葡聚糖凝膠G-100

參考文獻：
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"《小分子 Rhizobium sp. N613 胞外多糖的
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