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1.West Pico ECl超敏發光液是目前靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑：
(1) 具有靈敏度和高信噪(zao)比，可(ke)檢測10～100 fg抗原;
(2) 可在日(ri)光(guang)燈(deng)下進行發光(guang)操作;
(3) 發光(guang)迅速(su)，熒光(guang)可使X光(guang)膠片感光(guang)達12小(xiao)時(shi)以上，特別(bie)適用(yong)于痕量蛋(dan)白或核酸檢測(ce);
(4) 可(ke)使用更高的抗體稀釋(shi)倍數(1:2000～1:10000)，極其節省抗體。
2. West Pico ECl超敏發光液用途：用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。
3. West Pico ECl超敏發光液使用方法:
(1)執行常規SDS-PAGE、轉膜(mo)和Western Blot步驟。注(zhu)意(yi)用(yong)HRP標(biao)記lgG或用(yong)一(yi)抗(kang)-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
(2)Western Blot后一次洗(xi)膜的同時(shi)新(xin)鮮配制發光工作液(ye)：分別取等(deng)體(ti)積的溶液(ye)A和B，放入干凈容器中混(hun)合(he)。建議(yi)立即使(shi)用(yong)(yong)工作液(ye)，室溫(wen)放置數小時(shi)后仍可使(shi)用(yong)(yong)但靈敏(min)度略(lve)有降低。
(3)用鑷子取出膜(mo)，搭在濾(lv)紙上瀝干(gan)洗液(ye)但勿(wu)使膜(mo)*干(gan)燥。將膜(mo)*浸入發(fa)光工(gong)(gong)作液(ye)(0.125mL發(fa)光工(gong)(gong)作液(ye)/cm2膜(mo))中，與(yu)發(fa)光工(gong)(gong)作液(ye)充(chong)分接觸(chu)。室溫孵育3分鐘，準(zhun)備立即壓片(pian)曝光。孵育時(shi)間過長不會(hui)增加靈敏度，有時(shi)還會(hui)導(dao)致曝光條帶異常。發(fa)光過程(cheng)的本質(zhi)是(shi)酶(mei)促反應，使用過少的發(fa)光工(gong)(gong)作液(ye)不利反應進行，也會(hui)導(dao)致膜(mo)上條帶曝光不均(jun)和明顯(xian)降低(di)靈敏度。為(wei)達(da)節約目的可將膜(mo)剪(jian)小但勿(wu)降低(di)發(fa)光液(ye)用量(liang)。
(4)用鑷子夾起(qi)膜，搭在濾紙上(shang)瀝干發光工作液。但(dan)勿洗去(qu)發光液。
(5)打開X光膠片暗盒(he)，在(zai)暗盒(he)內表面(mian)(mian)鋪(pu)一(yi)張面(mian)(mian)積大于(yu)膜(mo)(mo)(mo)的保鮮(xian)膜(mo)(mo)(mo)。將Western Blot膜(mo)(mo)(mo)貼在(zai)保鮮(xian)膜(mo)(mo)(mo)上，將保鮮(xian)膜(mo)(mo)(mo)折(zhe)起來*包(bao)裹Western Blot膜(mo)(mo)(mo)，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣(yuan)部(bu)多余的保鮮(xian)膜(mo)(mo)(mo)。用濾紙吸(xi)去多余的發光工(gong)作液。用膠帶(dai)將覆蓋(gai)Western Blot膜(mo)(mo)(mo)的保鮮(xian)膜(mo)(mo)(mo)固定在(zai)暗盒(he)內，蛋白帶(dai)面(mian)(mian)向上。
(6)暗房內壓X光膠(jiao)片(pian)，分別曝(pu)光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖(chong)洗。
4. West Pico ECL超敏發光液儲存(cun)(cun)：4  oC密封(feng)避(bi)光保(bao)存(cun)(cun)一年以上。短期可放置室(shi)溫。
5. West Pico ECL超敏發光液安全性：無特(te)殊毒性，按普通化學(xue)品處理。
6. 注意事項：
(1)步(bu)驟1～5可(ke)在日光燈下(xia)操(cao)作;但發光液曝露于強(qiang)光下(xia)時間過(guo)久靈(ling)敏度可(ke)能略有降低，移到暗房操(cao)作可(ke)避(bi)免之。戴手套可(ke)以避(bi)免在膜上留下(xia)手印。
(2)長時間曝(pu)光或蛋白過量(liang)，將加深(shen)背景并使條(tiao)帶強(qiang)弱變化失去線性關系。曝(pu)光不足(zu)則條(tiao)帶模糊。
(3)發(fa)光(guang)(guang)工作液(ye)孵(fu)(fu)育約3分(fen)鐘后(hou)膜上(shang)的條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)。強條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)在暗房(fang)中肉(rou)(rou)眼(yan)可(ke)見(jian)，低豐(feng)度蛋白條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)較弱甚肉(rou)(rou)眼(yan)不(bu)(bu)可(ke)見(jian)但可(ke)使X光(guang)(guang)膠片曝光(guang)(guang)。不(bu)(bu)能簡單(dan)以肉(rou)(rou)眼(yan)觀察判斷條帶(dai)(dai)發(fa)光(guang)(guang)時間。肉(rou)(rou)眼(yan)不(bu)(bu)可(ke)見(jian)的熒光(guang)(guang)實際上(shang)可(ke)持續數小時并(bing)使X光(guang)(guang)膠片感光(guang)(guang)，因而(er)弱帶(dai)(dai)可(ke)曝光(guang)(guang)1-10小時。如果曝光(guang)(guang)后(hou)條帶(dai)(dai)不(bu)(bu)佳，可(ke)用洗膜緩沖液(ye)洗膜，重(zhong)新孵(fu)(fu)育二抗，然后(hou)重(zhong)新用ECL發(fa)光(guang)(guang)和曝光(guang)(guang)。
(4)由(you)于超敏(min)發(fa)光(guang)液(ye)極其靈敏(min)，強烈(lie)推薦大多數(shu)進口抗(kang)體起始濃度為一抗(kang)1:1000～1:4000，二抗(kang)1:2000～1:5000。抗(kang)體濃度過高(gao)將造成高(gao)背景或沒有條帶，導致失敗。
(5)某些(xie)保鮮膜包裹印跡(ji)膜時可能會(hui)淬滅熒光(guang)，應選擇高質量(liang)保鮮膜。
(6)使用肉(rou)眼可(ke)見(jian)的預染(ran)色蛋白Marker和熒光-放(fang)射自顯影曝光標簽可(ke)確(que)定膠(jiao)片上條帶的位置和大小。
(7)NaN3能抑(yi)制HRP活(huo)性，回收第二抗(kang)體應避免使(shi)用(yong)NaN3，如必需使(shi)用(yong)勿超(chao)過0.01%。

 
參考文獻：
《IL‐37 inhibits invasion and metastasis in non‐small cell lung cancer by suppressing the IL‐6/STAT3 signaling pathway》 作者:Mingfang Jiang,  Ye Wang,  Hua Zhang,  Youxin Ji,  Peng Zhao,  Rongli Sun,  Chunling Zhang 期刊:Thoracic Cancer 影響(xiang)因(yin)子(zi):2.569 PMID:29575809