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Z0005 引物合成5-OD 索萊寶自產

引物(wu)合(he)(he)成(cheng)是通(tong)過(guo)測定引物(wu)的OD值，溶解引物(wu)，終合(he)(he)成(cheng)引物(wu)的一(yi)個完(wan)善的過(guo)程。

目前引物合成(cheng)基本(ben)采用固(gu)相亞(ya)磷酰胺三(san)酯(zhi)法。亞(ya)磷(lin)酰胺三(san)酯(zhi)法合(he)成DNA的(de)(de)片段，具有高效(xiao)、快速的(de)(de)偶(ou)聯以及起始反應物(wu)比較穩(wen)定(ding)的(de)(de)特點。亞(ya)磷(lin)酰胺三(san)酯(zhi)法是將DNA固定(ding)在固相(xiang)載體上完(wan)成DNA鏈的(de)合(he)成的(de)，合(he)成的(de)方向是由待合(he)成引物(wu)的(de)3′端(duan)向5′端(duan)合(he)成的(de)，相鄰(lin)的(de)核(he)苷酸(suan)通過(guo)3′→5′磷酸二酯鍵連接。

引物合成特點

1.引(yin)物合(he)成的(de)純(chun)度高。

2.合(he)成的序列長。

3.合成的效果好。

引(yin)物純化方式(shi)

1.C18柱脫(tuo)鹽(yan)：有(you)人稱其為簡易反相柱，它對(dui)DNA有(you)特(te)異性的吸附，可以被有(you)機溶解洗(xi)脫(tuo)，但不會(hui)被水(shui)洗(xi)脫(tuo)，所以能(neng)有(you)效地去(qu)除鹽(yan)分。它不能(neng)有(you)效去(qu)除比目(mu)的片段短的小片段。這種方法一(yi)般不會(hui)對(dui)普通PCR反應產生影響(xiang)。對(dui)于需要用于測序、克隆的引物不能(neng)使(shi)用這個。

2.OPC純化(hua)： OPC純化(hua)是根據(ju)DNA保護基（DMTr基）和(he)Cartridge柱中樹脂間(jian)的(de)親(qin)合力作(zuo)用的(de)原理進行純化(hua)目的(de)DNA的(de)片段。

3.PAGE純(chun)(chun)：PAGE純(chun)(chun)化(hua)法(fa)(fa)是(shi)使用變性聚(ju)丙烯(xi)酰胺凝(ning)膠(jiao)(jiao)電(dian)泳，對DNA的(de)片段進行分離，然后(hou)從凝(ning)膠(jiao)(jiao)中(zhong)回收目的(de)DNA的(de)方法(fa)(fa)。PAGE純(chun)(chun)化(hua)法(fa)(fa)也是(shi)一種非常有(you)效的(de)DNA純(chun)(chun)化(hua)方法(fa)(fa)，純(chun)(chun)化(hua)后(hou)的(de)DNA純(chun)(chun)度大于(yu)95%，對長鏈Oligo DNA (大于(yu)50mer)的(de)純(chun)(chun)化(hua)特別有(you)效。

4.HPLC純化(hua)：HPLC純化(hua)是使(shi)用高效液相色譜的(de)原理，對(dui)DNA的(de)片(pian)段(duan)進行(xing)純化(hua)。純度可以大于(yu)99%。主要用于(yu)短鏈和(he)修飾引物的(de)純化(hua)。

5引物的OD數的定量

用(yong)紫外分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計，波長(chang)260nm，石英比色杯，光(guang)(guang)程為(wei)1厘米，測定(ding)(ding)溶液的光(guang)(guang)密(mi)度。測定(ding)(ding)時溶液的光(guang)(guang)密(mi)度好(hao)稀釋到0.2-1.0之(zhi)間。DNA干粉用(yong)一定(ding)(ding)體積的水(shui)充分振(zhen)蕩溶解以后，用(yong)1ml水(shui)稀釋測OD值。需(xu)要根(gen)據稀釋倍數換算出母(mu)液的OD值。