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Z0020  引物合成2-OD  索萊寶自產 

引物合成是(shi)通過測定引物的OD值，溶解引物，終合成引物的一個(ge)完善的過程(cheng)。

目前引物合成(cheng)基本采(cai)用固相亞磷(lin)酰胺三(san)酯(zhi)法。亞(ya)磷(lin)酰(xian)胺(an)三(san)酯(zhi)法合成DNA的(de)(de)片段，具有高(gao)效、快速的(de)(de)偶聯以(yi)及起始反應物比(bi)較(jiao)穩定的(de)(de)特點。亞(ya)磷(lin)酰(xian)胺(an)三(san)酯(zhi)法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的(de)(de)合(he)(he)(he)成的(de)(de)，合(he)(he)(he)成的(de)(de)方向(xiang)是由待(dai)合(he)(he)(he)成引物的(de)(de)3′端向(xiang)5′端合(he)(he)(he)成的(de)(de)，相鄰(lin)的(de)(de)核苷(gan)酸通過3′→5′磷酸二(er)酯鍵連接(jie)。

引物(wu)合成(cheng)特(te)點

1.引物合成的純度高。

2.合成的序列(lie)長。

3.合成的效(xiao)果好(hao)。

引物純化方式(shi)

1.C18柱(zhu)脫鹽：有人稱其為簡易反相柱(zhu)，它(ta)對DNA有特(te)異性的(de)吸附，可以被有機(ji)溶(rong)解洗脫，但(dan)不(bu)會被水洗脫，所以能有效地去(qu)除鹽分。它(ta)不(bu)能有效去(qu)除比目的(de)片(pian)段短的(de)小片(pian)段。這種(zhong)方法(fa)一般(ban)不(bu)會對普通PCR反應產生影響。對于需要用于測(ce)序、克隆(long)的(de)引物(wu)不(bu)能使(shi)用這個。

2.OPC純(chun)(chun)(chun)化： OPC純(chun)(chun)(chun)化是根據(ju)DNA保護基（DMTr基）和Cartridge柱中樹脂間的(de)親(qin)合(he)力作用的(de)原理進行純(chun)(chun)(chun)化目的(de)DNA的(de)片段。

3.PAGE純(chun)：PAGE純(chun)化(hua)法是(shi)使(shi)用(yong)變性聚丙烯(xi)酰胺凝膠電泳(yong)，對DNA的(de)(de)(de)片段(duan)進行分離，然后從凝膠中回(hui)收(shou)目的(de)(de)(de)DNA的(de)(de)(de)方(fang)法。PAGE純(chun)化(hua)法也是(shi)一種非常有效的(de)(de)(de)DNA純(chun)化(hua)方(fang)法，純(chun)化(hua)后的(de)(de)(de)DNA純(chun)度大于95%，對長鏈(lian)Oligo DNA (大于50mer)的(de)(de)(de)純(chun)化(hua)特(te)別有效。

4.HPLC純(chun)(chun)(chun)化(hua)：HPLC純(chun)(chun)(chun)化(hua)是使用高(gao)效液相色譜的原理，對DNA的片(pian)段(duan)進行純(chun)(chun)(chun)化(hua)。純(chun)(chun)(chun)度可以大于99%。主要用于短鏈和(he)修(xiu)飾(shi)引物的純(chun)(chun)(chun)化(hua)。

5引物的OD數的定量

用紫外(wai)分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計，波長260nm，石英比色杯(bei)，光(guang)(guang)程為1厘(li)米，測定(ding)溶(rong)液的(de)光(guang)(guang)密度。測定(ding)時溶(rong)液的(de)光(guang)(guang)密度好稀(xi)釋到0.2-1.0之(zhi)間。DNA干(gan)粉(fen)用一(yi)定(ding)體(ti)積的(de)水充分振蕩(dang)溶(rong)解以(yi)后，用1ml水稀(xi)釋測OD值(zhi)。需要根據稀釋倍數換算出母(mu)液的OD值。