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脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 組(zu)(zu)織(zhi)：按照組(zu)(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：試(shi)劑一體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議(yi)稱取約 0.1g 組(zu)(zu)織(zhi)，加入 1mL 試(shi)劑一）進行冰浴勻漿。16000rpm，4℃離心 40min，取上清置于(yu)冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞(bao)數量（10 4個）：提取液體積（mL）為 500-1000:1 的比例（建議(yi) 500 萬細胞(bao)加(jia)入 1mL 試劑(ji)一），冰浴超聲(sheng)波破碎細胞(bao)（功率 300w，超聲(sheng) 3 秒(miao)，間隔 7 秒(miao)，總時(shi)間 3 分鐘）；然后 16000rpm，4℃離心 40min，取上清置于冰上待(dai)測。

二(er)、FAS 測定操作：

1. 分光光度計預(yu)熱 30min，調(diao)節(jie)波長到 340 nm，蒸餾水(shui)調(diao)零。

2. 試(shi)劑四(si)置于 40℃水浴中(zhong)預熱 30 min 以上。

3. 空白管(guan)：在 500μLEP 管(guan)中依次加入 20μL 蒸餾水、4μL 試劑二、4μL 試劑三、164μL 試劑四和 8μL 試劑五，迅速混(hun)勻后(hou)于 340nm 處(chu)測定吸(xi)(xi)光(guang)值，記錄(lu)第 30s 和 90s 時吸(xi)(xi)光(guang)值，分別記錄(lu)為 A1 和 A2。△A 空=A1-A2。

4. 測(ce)定管(guan)：在 500μLEP 管(guan)中依次(ci)加入 20μL 上(shang)清液、4μL 試劑二、4μL 試劑三、164μL 試劑四和(he) 8μL 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測(ce)定吸光值，記(ji)(ji)錄第 30s 和(he) 90s 時吸光值，分(fen)別記(ji)(ji)錄為 A1 和(he) A2。△A 測(ce)=A3-A4。

脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒

FAS 活(huo)性計(ji)算：使用微量(liang)石英比色皿測定的計(ji)算公式(shi)如下：

（1） 按照蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)濃度計算活性(xing)單位定(ding)義：37℃中每(mei)毫克蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)每(mei)分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 測定(ding)管–△A 空白(bai)(bai)管)÷ε÷d×V 反總×10 6] ÷(Cpr×V 樣(yang))÷T=1.61×(△A 測定(ding)管 –△A 空白(bai)(bai)管) ÷Cpr

（2） 按照樣(yang)本質量(liang)計(ji)算(suan)活性單(dan)位定(ding)義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/g) =[(△A 測定(ding)管(guan)–△A 空白管(guan))÷ε÷d×V 反(fan)總(zong)×10 6] ÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=1.61×(△A 測定(ding)管(guan) –△A 空白管(guan)) ÷W

（3） 按細胞(bao)數量計算活性單(dan)位(wei)定(ding)義：37℃中每 10 4個細胞(bao)每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/10 4 cell ) =[(△A 測(ce) 定(ding) 管 –△A 空 白 管 )÷ε÷d×V 反 總(zong) ×10 6] ÷( 細 胞(bao) 數 量 ×V 樣 ÷V 樣總(zong))÷T=1.61×(△A 測(ce)定(ding)管–△A 空白管) ÷細胞(bao)數量 ε：NADPH 摩(mo)爾消(xiao)光系(xi)數，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色(se)皿(min)光徑，1 cm；V 反總(zong)：反應體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積， 200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度(du)，mg/mL；W：樣本質量，V 樣：加入反應體(ti)系(xi)中上清液體(ti)積，20μL=0.02mL；T：反應時間(jian)，1min。

使用 96 孔板測定(ding)的計算公式如(ru)下：

（1） 按照蛋白(bai)濃度計算活性單位定(ding)義：37℃中每毫(hao)克蛋白(bai)每分鐘氧化 1μmol NADPH 為(wei) 1U。 FAS(U/mg prot) =[(△A 測定(ding)管(guan)–△A 空(kong)白(bai)管(guan))÷ε÷d×V 反總×10 6] ÷(Cpr×V 樣(yang))÷T=3.22×(△A 測定(ding)管(guan) –△A 空(kong)白(bai)管(guan)) ÷Cpr

（2） 按照(zhao)樣(yang)本質量計算活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘(zhong)氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/g) =[(△A 測(ce)定管(guan)–△A 空(kong)白(bai)管(guan))÷ε÷d×V 反總×10 6] ÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=3.22×(△A 測(ce)定管(guan) –△A 空(kong)白(bai)管(guan)) ÷W

（3） 按細胞數量(liang)計算活性單位定(ding)義：37℃中(zhong)每(mei) 10 4個細胞每(mei)分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1U。 FAS(U/10 4 cell ) =[(△A 測 定(ding) 管 –△A 空 白(bai) 管 )÷ε÷d×V 反(fan) 總(zong) ×10 6] ÷( 細 胞 數 量(liang) ×V 樣(yang)(yang)(yang) ÷V 樣(yang)(yang)(yang)總(zong))÷T=3.22×(△A 測定(ding)管–△A 空白(bai)管) ÷細胞數量(liang) ε：NADPH 摩爾消(xiao)光(guang)系數，6.22×10 3L/mol/cm；d：96 孔板光(guang)徑，0.5 cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)(ying)體系總(zong)體積， 200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白(bai)質濃度，mg/mL；W：樣(yang)(yang)(yang)本質量(liang)，V 樣(yang)(yang)(yang)：加入反(fan)應(ying)(ying)體系中(zhong)上清液體積，20μL=0.02mL；T：反(fan)應(ying)(ying)時(shi)間，1min。

脂肪酸合成酶(FAS)活性檢測試劑盒

試(shi)劑(ji)一(yi)：液(ye)體(ti)×1 瓶，－20℃保(bao)存(cun)(cun)。用(yong)前 1 d 取出置于 4℃充分(fen)解凍后混勻(yun)。試(shi)劑(ji)二：粉(fen)劑(ji)×1 瓶。臨用(yong)前加入(ru) 440 μL 試(shi)劑(ji)四(si)，充分(fen)溶解。試(shi)劑(ji)三：粉(fen)劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)(cun)。臨用(yong)前加入(ru) 440 μL 試(shi)劑(ji)四(si)，充分(fen)溶解。試(shi)劑(ji)四(si)：液(ye)體(ti)×1 瓶, 4℃保(bao)存(cun)(cun)。試(shi)劑(ji)五：粉(fen)劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)(cun)。臨用(yong)前加入(ru) 840μL 試(shi)劑(ji)四(si)，充分(fen)溶解。