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 BCA蛋白濃度測定試劑盒

注意事項：

1. 長期不用(yong)時(shi)，Cu試劑與(yu)PBS稀釋液可置于2-8℃保存，如發(fa)現細菌污染則應丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現結晶沉淀(dian)時(shi)，可37℃溫育使(shi)其(qi)*溶解, 不影響使(shi)用(yong)。

2. 樣品中若含有較多干擾(rao)物(wu)質(zhi)時，請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

3. 為(wei)了您(nin)的(de)安全和健康，請穿實驗(yan)服并戴一次(ci)性(xing)手套操作。

 BCA蛋白濃度測定試劑盒

操作說明：

一. 微孔酶標儀法

1. 配制工(gong)作液：根據標(biao)準品和樣(yang)品數量，按50體積BCA試劑加(jia)1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工(gong)作液，充分混(hun)勻(混(hun)合時(shi)可能(neng)會有渾濁，但(dan)混(hun)勻后就會消失)。BCA工(gong)作液室溫24小(xiao)時(shi)內(nei)穩定(ding)。

2. 稀(xi)釋(shi)標(biao)準(zhun)品：取10μL BSA標(biao)準(zhun)品用(yong)PBS稀(xi)釋(shi)100μL（樣品一(yi)般可用(yong)PBS稀(xi)釋(shi)），使終濃度為0.5mg/mL。將標(biao)準(zhun)品按(an)0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白標(biao)準(zhun)品孔中，加PBS補足20μL。

3. 將(jiang)樣品(pin)(pin)作適當稀(xi)釋（多做幾(ji)個梯度(du)，如作2倍(bei)、4倍(bei)、8倍(bei)稀(xi)釋），加20μL到96孔板的樣品(pin)(pin)孔中。由于(yu)移液器在取小量樣品(pin)(pin)時誤(wu)差偏(pian)大(da)，標(biao)準(zhun)線前面的點可能不很準(zhun)確，所(suo)以盡可能的讓(rang)樣品(pin)(pin)點落在標(biao)準(zhun)線1/2后。

4. 各孔加入200μL BCA工作液(ye)，37℃放置15-30分鐘。用酶(mei)標儀(yi)測定A562nm，根(gen)據標準曲(qu)線(xian)計算(suan)出(chu)蛋白濃(nong)度(du)。使用溫箱孵育時(shi)，應注(zhu)意防止(zhi)因水分蒸發影響檢測結果。

二. 分光光度計法 如(ru)沒有酶標(biao)儀(yi)，可用分(fen)光光度(du)計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。 步驟如(ru)下：

1. 配(pei)制(zhi)(zhi)工(gong)作(zuo)液: 根據標準(zhun)品(pin)和樣(yang)品(pin)數量，按50體(ti)積(ji)BCA試劑(ji)加1體(ti)積(ji)Cu試劑(ji)（50:1）配(pei)制(zhi)(zhi)成BCA工(gong)作(zuo)液，充分混(hun)勻(混(hun)合(he)時(shi)可能會有(you)渾濁，但混(hun)勻后就會消(xiao)失(shi))。BCA工(gong)作(zuo)液室(shi)溫24小時(shi)內穩定。

2. 稀(xi)釋(shi)標準品：取100μL BSA標準品用PBS稀(xi)釋(shi)1mL（樣品一般可用PBS稀(xi)釋(shi)），使終濃(nong)度為0.5mg/mL。

3. 取八支（或者更多）5mL離心管，標上(shang)號，按下表加(jia)入試劑(ji)。

4.37℃放置15-30分(fen)鐘。用分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)測562nm處吸光(guang)值，根據標準(zhun)曲線(xian)計(ji)算出(chu)蛋白濃度(du)。

參考文獻：
《Effect of 1α, 25-dihydroxyvitamin D3 on the osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells and the underlying regulatory mechanism》 作者:Yawen Ji，Panpan Zhang，Yixiao Xing，Linglu Jia，Yunpeng Zhang，Tingting Jia，Xuan Wu，Bin Zhao，Xin Xu 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365053
《Rhein enhances the cytotoxicity of effector lymphocytes in colon cancer under hypoxic conditions》 作者(zhe):Xiangfei Yuan,Wencong Tian,Yang Hua,Lijuan Hu,Jing Yang,Junmuzi Xie,Jiacai Hu,Feng Wang 期刊:Experimental and Therapeutic Medicine 影響因子:1.448 PMID:30542494