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本公司生產的*0感受態細胞是采用大腸桿菌*0菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達10⁸，-70℃保存六個月轉化效率不(bu)發生(sheng)改(gai)變。

基因型：F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

*0感受態細胞特 點：一種(zhong)用(yong)于鋪制與(yu)培養質(zhi)粒(li)平(ping)板和粘(zhan)粒(li)平(ping)板的(de)重級缺陷的(de)抑制型菌株。其中(zhong)φ80 lacZΔM15基(ji)因(yin)的(de)產物可與(yu)pUC載體編(bian)碼的(de)β-半乳糖苷(gan)酶氨基(ji)端實現(xian)α-互補，可用(yong)于藍白斑篩選。該菌株適用(yong)于高效的(de)DNA克隆和質(zhi)粒(li)擴增，能(neng)保證高拷貝(bei)質(zhi)粒(li)的(de)穩定遺傳。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1，將感(gan)(gan)受態(tai)細胞置于冰上融化(hua)，以下實(shi)驗以100ul感(gan)(gan)受態(tai)細胞為例(li)。

2、向(xiang)感(gan)受態細胞(bao)懸液(ye)中加入需轉化的目的DNA，注意(yi)目的DNA的體積(ji)(ji)不(bu)要超過感(gan)受態細胞(bao)懸液(ye)體積(ji)(ji)的十(shi)分(fen)之一，輕(qing)輕(qing)旋轉離(li)心管以混(hun)勻(yun)內(nei)容物，冰浴放(fang)置30分(fen)鐘。

3、將離心(xin)管置(zhi)于42℃水浴中(zhong)60-90秒，然后快(kuai)速轉移到冰浴中(zhong)放置(zhi)2-3分鐘，注意不要搖動(dong)離心(xin)管。

4、向離心(xin)管中加入500ul無(wu)菌無(wu)抗(kang)的(de)SOC或LB培(pei)養基(ji)，37℃ 180rpm振蕩培(pei)養1小時(shi)。目的(de)是使(shi)質粒上(shang)相關的(de)抗(kang)性標記基(ji)因(yin)表達，使(shi)菌體(ti)復蘇。

5、取(qu)適量(liang)(liang)已轉(zhuan)化(hua)的(de)感受態細(xi)(xi)胞涂(tu)布含相應抗(kang)生素的(de)SOC或LB平板，37℃倒置培養12-16小(xiao)時(shi)。涂(tu)布用量(liang)(liang)可(ke)根據(ju)具體實驗來調整，如轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA總量(liang)(liang)較多，可(ke)取(qu)100ul左右的(de)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物(wu)涂(tu)板；反(fan)之，如轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA總量(liang)(liang)較少，可(ke)取(qu)200-300ul的(de)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物(wu)涂(tu)板。過(guo)多菌液(ye)(ye)可(ke)以(yi)抑制細(xi)(xi)菌生長。如果(guo)預(yu)計的(de)克隆較少，可(ke)通過(guo)離心后吸除部分培養液(ye)(ye)，懸浮(fu)菌體后將其(qi)涂(tu)布于一(yi)個平板中。涂(tu)布剩余的(de)菌液(ye)(ye)可(ke)4℃保存，如果(guo)次(ci)日的(de)轉(zhuan)化(hua)菌落(luo)數過(guo)少可(ke)以(yi)將剩下的(de)菌液(ye)(ye)再涂(tu)布新的(de)平板。

注意事項：

1、感受態細胞應保存(cun)在(zai)-70℃，不可反復凍融(rong)，否則(ze)其轉(zhuan)化效率將會降(jiang)低。

2、實驗過程中應嚴(yan)格無菌操(cao)作，防止(zhi)其它DNA或雜菌的污染(ran)，避免為(wei)以后的篩選、鑒(jian)定帶來影響。

3、轉化(hua)(hua)時(shi)(shi)，轉化(hua)(hua)效率(lv)與外源DNA的濃度在一定范(fan)圍內(nei)成正比，但當(dang)加(jia)入的外源DNA量過多或體積(ji)過大反而(er)會降低轉化(hua)(hua)效率(lv)。轉化(hua)(hua)時(shi)(shi)DNA體積(ji)要小于感(gan)受態細(xi)胞體積(ji)的十(shi)分之一。

4、轉化率的計算(suan)：轉化率＝產生菌(jun)落(luo)的總數/鋪板DNA總量。

5、為防止轉(zhuan)化實驗不成功，可(ke)以(yi)保留部分連(lian)接產物，以(yi)重(zhong)新轉(zhuan)化，將損失降到低。