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Solarbio DH5α感受態細胞

本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存3-5個月轉化效(xiao)率(lv)不發(fa)生改變。

基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特   點: 一種用(yong)于鋪制與培養質(zhi)粒平板和(he)粘(zhan)粒平板的重組缺陷(xian)的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的產物可與pUC載(zai)體(ti)編(bian)碼的 β-半乳(ru)糖(tang)苷(gan)酶氨基端實現β互補(bu)，可用(yong)于藍白斑(ban)篩(shai)選。

操作方法：（以下操作均按(an)無菌條件的標(biao)準進(jin)行）

1、將感(gan)受(shou)態細胞置于(yu)冰上(shang)融化(hua)，以(yi)下實(shi)驗以(yi)100ul感(gan)受(shou)態細胞為例。

2、向感受態細胞懸(xuan)液(ye)中加入需轉(zhuan)(zhuan)化的目(mu)的DNA，注意目(mu)的DNA的體積不要超過(guo)感受態細胞懸(xuan)液(ye)體積的十(shi)分之一(yi)，輕輕旋轉(zhuan)(zhuan)離(li)心管以(yi)混勻內容物，冰浴放置30分鐘。

3、將(jiang)離心管(guan)置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分(fen)鐘，注意(yi)不要(yao)搖動離心管(guan)。

4、向離心管中加入500ul無(wu)菌無(wu)抗的SOC或(huo)LB培(pei)養基，37℃ 180rpm振蕩培(pei)養1小時。目的是(shi)使質粒(li)上相(xiang)關(guan)的抗性標記基因表達，使菌體復(fu)蘇。

5、取適量已轉(zhuan)化(hua)(hua)的(de)感受(shou)態細胞涂(tu)(tu)布(bu)含相(xiang)應抗生(sheng)素(su)的(de)SOC或LB平(ping)(ping)板(ban)(ban)，37℃倒置培養12-16小時。涂(tu)(tu)布(bu)用量可根據具體(ti)(ti)實驗(yan)來調整，如(ru)轉(zhuan)化(hua)(hua)的(de)DNA總量較(jiao)多(duo)，可取100ul左右的(de)轉(zhuan)化(hua)(hua)產(chan)物(wu)涂(tu)(tu)板(ban)(ban)；反之，如(ru)轉(zhuan)化(hua)(hua)的(de)DNA總量較(jiao)少(shao)(shao)，可取200-300ul的(de)轉(zhuan)化(hua)(hua)產(chan)物(wu)涂(tu)(tu)板(ban)(ban)。過(guo)(guo)多(duo)菌(jun)液(ye)(ye)可以(yi)抑(yi)制細菌(jun)生(sheng)長。如(ru)果(guo)預計的(de)克隆較(jiao)少(shao)(shao)，可通(tong)過(guo)(guo)離心后(hou)吸(xi)除(chu)部(bu)分培養液(ye)(ye)，懸浮菌(jun)體(ti)(ti)后(hou)將(jiang)其涂(tu)(tu)布(bu)于一(yi)個平(ping)(ping)板(ban)(ban)中。涂(tu)(tu)布(bu)剩余的(de)菌(jun)液(ye)(ye)可4℃保(bao)存(cun)，如(ru)果(guo)次日的(de)轉(zhuan)化(hua)(hua)菌(jun)落數(shu)過(guo)(guo)少(shao)(shao)，可以(yi)將(jiang)剩下的(de)菌(jun)液(ye)(ye)再涂(tu)(tu)布(bu)新的(de)平(ping)(ping)板(ban)(ban)。

注意事項：

      1、感受態細胞應保(bao)存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率(lv)將會(hui)降低。

      2、實驗過程中應嚴格無(wu)菌(jun)操(cao)作，防止其它DNA或(huo)雜菌(jun)的污染，避免為以后(hou)的篩選、鑒定帶來(lai)影響。

      3、轉(zhuan)化時(shi)，轉(zhuan)化效(xiao)率與外源DNA的濃度在(zai)一(yi)定范(fan)圍內成正比，但當(dang)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低(di)轉(zhuan)化效(xiao)率。轉(zhuan)化時(shi)DNA體積要(yao)小于(yu)感受態細胞體積的十(shi)分之一(yi)。

     4、轉化率的(de)計(ji)算：轉化率＝產生菌落的(de)總數/鋪板(ban)DNA總量。

     5、為(wei)防止轉(zhuan)(zhuan)化實驗不成功(gong)，可以(yi)(yi)保(bao)留部(bu)分連接產物，以(yi)(yi)重(zhong)新轉(zhuan)(zhuan)化，將(jiang)損失降(jiang)到低(di)。

相關文獻：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者(zhe):Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30711013

Solarbio DH5α感受態細胞