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2,2- 聯喹啉- 4,4- 二甲酸二鈉BCA 蛋白定量

操作說明：

一. 微孔酶標儀法

1. 配(pei)制工作液(ye)：根據標(biao)準品和樣品數量，按50體(ti)積BCA試劑加(jia)1體(ti)積Cu試劑（50:1）配(pei)制成BCA工作液(ye)，充分(fen)混勻(yun)(混合時可能(neng)會(hui)有(you)渾濁(zhuo)，但(dan)混勻(yun)后(hou)就會(hui)消(xiao)失)。BCA工作液(ye)室(shi)溫24小時內穩(wen)定(ding)。

2. 稀(xi)(xi)釋標(biao)(biao)準品：取10μL BSA標(biao)(biao)準品用(yong)(yong)PBS稀(xi)(xi)釋100μL（樣品一般可用(yong)(yong)PBS稀(xi)(xi)釋），使終(zhong)濃度為0.5mg/mL。將標(biao)(biao)準品按(an)0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加(jia)到(dao)96孔板的蛋(dan)白標(biao)(biao)準品孔中，加(jia)PBS補足(zu)20μL。

3. 將樣(yang)品作適當稀釋(shi)（建議多做幾個(ge)梯度，如作2倍(bei)、4倍(bei)、8倍(bei)稀釋(shi)），加20μL到96孔板(ban)的樣(yang)品孔中。由(you)于移液(ye)器(qi)在取小量樣(yang)品時誤差偏大(da)，標準線前(qian)面的點可能(neng)不很(hen)準確(que)，所以盡(jin)可能(neng)的讓樣(yang)品點落在標準線1/2后。

4. 各(ge)孔加入200μL BCA工(gong)作液，37℃放置15-30分(fen)鐘。用(yong)酶標(biao)儀測(ce)(ce)定A562nm，根據(ju)標(biao)準(zhun)曲線計算出蛋(dan)白濃度。使用(yong)溫箱(xiang)孵育時，應(ying)注(zhu)意防止因(yin)水分(fen)蒸發影(ying)響檢測(ce)(ce)結(jie)果。

二. 分光光度計法 如(ru)沒有酶標(biao)儀，可用分光(guang)光(guang)度計在離心管(guan)中(zhong)混勻后加(jia)入比色(se)(se)皿中(zhong)比色(se)(se)。 步(bu)驟如(ru)下：

1. 配制(zhi)工作(zuo)液(ye): 根據標準品和樣(yang)品數(shu)量(liang)，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制(zhi)成BCA工作(zuo)液(ye)，充分混(hun)勻(混(hun)合時(shi)可能會有(you)渾(hun)濁，但混(hun)勻后就(jiu)會消(xiao)失)。BCA工作(zuo)液(ye)室溫24小時(shi)內穩定。

2. 稀(xi)(xi)釋(shi)標準品：取100μL BSA標準品用PBS稀(xi)(xi)釋(shi)1mL（樣品一般可用PBS稀(xi)(xi)釋(shi)），使終濃度為0.5mg/mL。

3. 取八支(zhi)（或者更多）5mL離心管，標上(shang)號，按下表加入試劑。

4.37℃放置15-30分(fen)鐘。用分(fen)光(guang)光(guang)度計測562nm處吸光(guang)值(zhi)，根據標(biao)準曲線計算出(chu)蛋白濃度。

注意事項：

1. 長期不用時(shi)，Cu試劑與PBS稀釋(shi)液可(ke)置于(yu)2-8℃保存，如(ru)發現(xian)細菌污染則應丟棄。BCA試劑在低溫(wen)條件下(xia)出現(xian)結晶沉(chen)淀時(shi)，可(ke)37℃溫(wen)育使(shi)其*溶解, 不影(ying)響使(shi)用。

2. 樣品中若(ruo)含有較多干(gan)擾(rao)物質時(shi)，請采(cai)用(yong)Bradford蛋(dan)白濃度測(ce)定試劑(ji)盒。

3. 為了您的安(an)全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作(zuo)。

 參考文獻：
《Endometrial mesenchymal stem cells isolated from menstrual blood repaired epirubicin-induced damage to human ovarian granulosa cells by inhibiting the expression of Gadd45b in cell cycle pathway》 作(zuo)者:Zhongrui Yan?, Fengyi Guo?, Qing Yuan?, Yu Shao?, Yedan Zhang?, Huiyan Wang?, Shaohua Hao and Xue Du authorView ORCID ID profile 期刊:Stem Cell Research & Therapy 影(ying)響因子:4.963 PMID:30606243

2,2- 聯喹啉- 4,4- 二甲酸二鈉BCA 蛋白定量