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For research use only. Not for use in diagnostic procedures.

MANUFACTURED AND DISTRIBUTED BY:

Country︱Company: China︱Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

Address: NO.8, Liandong U Valley, Tongzhou District, Beijing, P.R.China.

TABLE OF CONTENTS SECTION

人白細胞介素2 ELISA試劑盒?

人白細胞介素-2 ELISA 試劑盒
產品編號：SEKH-0008
適用于人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本

人白細胞介素2 ELISA試劑盒

背景介紹：
     白細(xi)(xi)胞(bao)(bao)介素 2（IL-2）是一(yi)種在機體免疫(yi)應(ying)答中(zhong)扮演重(zhong)中(zhong)之重(zhong)角(jiao)色的(de)多效性細(xi)(xi)胞(bao)(bao)因(yin)子。其于 1976 年被(bei) Morgan 在小鼠脾細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)上清(qing)中(zhong)發(fa)現，由于它能很好地促(cu)進(jin)和(he)(he)維持(chi) T 細(xi)(xi)胞(bao)(bao)長期培養(yang), 故(gu)將其稱(cheng)之為(wei)(wei)(wei)為(wei)(wei)(wei) T 細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長 因(yin)子，1979 年統一(yi)命名為(wei)(wei)(wei) IL-2。人 IL-2 含有 133 個(ge)氨基酸殘基，分子量(liang)為(wei)(wei)(wei) 15.5kDa。IL-2 重(zhong)要的(de)作(zuo)用(yong)是 誘導 T 淋巴細(xi)(xi)胞(bao)(bao)增殖和(he)(he)分化，此外，IL-2 還可調節多種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)免疫(yi)應(ying)答。在體內，IL-2 有抗腫瘤(liu)、抗微生 物感(gan)染(ran)、引起(qi)移植(zhi)排斥和(he)(he)自(zi)身免疫(yi)以及(ji)免疫(yi)調節等作(zuo)用(yong)。

檢測原理：
      Solarbio  ELISA 試劑盒采用基于雙(shuang)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)夾心法(fa)的(de)(de)酶(mei)聯免疫(yi)吸附檢測技術。將抗(kang)(kang)(kang)人(ren) IL-2 單克 隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)包(bao)被(bei)在酶(mei)標板(ban)上(shang)(shang)；分(fen)別加(jia)入梯(ti)度稀釋的(de)(de)標準品和(he)(he)預稀釋的(de)(de)樣本(ben)，標準品和(he)(he)樣本(ben)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)人(ren) IL-2 會與酶(mei)標 板(ban)上(shang)(shang)的(de)(de)包(bao)被(bei)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)充分(fen)結(jie)合(he)；洗(xi)板(ban)后加(jia)入生物(wu)素(su)化抗(kang)(kang)(kang)人(ren) IL-2 抗(kang)(kang)(kang)體(ti)，該抗(kang)(kang)(kang)體(ti)會與板(ban)子上(shang)(shang)包(bao)被(bei)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)捕獲(huo)的(de)(de)標準品 和(he)(he)樣本(ben)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)人(ren) IL-2 發生特異性結(jie)合(he)；洗(xi)板(ban)后加(jia)入辣(la)根過(guo)氧化物(wu)酶(mei)（HRP）標記(ji)的(de)(de)鏈霉(mei)(mei)親和(he)(he)素(su)，生物(wu)素(su)與鏈 霉(mei)(mei)親和(he)(he)素(su)會發生高強度的(de)(de)非(fei)共價結(jie)合(he)；洗(xi)板(ban)后加(jia)入顯色劑底物(wu) TMB，若反(fan)應孔(kong)中(zhong)(zhong)(zhong)樣品存在不(bu)同(tong)濃度的(de)(de)人(ren) IL-2，則 HRP 會使無色 TMB 變(bian)成(cheng)不(bu)同(tong)深(shen)淺（正(zheng)相關）的(de)(de)藍色物(wu)質，加(jia)入終(zhong)止液后反(fan)應孔(kong)會變(bian)成(cheng)黃(huang)色；后， 在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定(ding)反(fan)應孔(kong)樣品吸光(guang)度（OD），樣本(ben)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)人(ren) IL-2 濃度與 OD 成(cheng)正(zheng)比，通 過(guo)繪制標準曲(qu)線和(he)(he)四參數(shu)擬合(he)軟件便可計(ji)算出(chu)樣本(ben)中(zhong)(zhong)(zhong)人(ren) IL-2 的(de)(de)濃度。

原理圖：

注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免交(jiao)叉污染，請在試(shi)驗中使用 1 次性試(shi)管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑(su)料容(rong)器(qi)。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證(zheng)結果準確，每次檢測均需(xu)做標(biao)準曲線。

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物
實(shi)驗(yan)室安全防(fang)護有關(guan)管理規(gui)定執行。

自備實驗器材（不提供，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用(yong)聚(ju)丙烯試管

樣本收集及儲存：
1. 細胞培養上清：
將細胞培養基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于
-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請再次離心，避免反復凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min ，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結果；如果樣本中的靶標物檢測濃度高
于標準品的值，請將樣品做適(shi)當(dang)倍數稀(xi)(xi)釋后檢測，建議正(zheng)式實驗前做預實驗以確(que)定(ding)稀(xi)(xi)釋倍數。

試劑準備：
1. 試劑回溫：先在實驗前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現結晶，請放入
37℃溫浴直到結晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標準(zhun)(zhun)品(pin)梯度稀釋：加入標準(zhun)(zhun)品(pin)/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干(gan)標準(zhun)(zhun)品(pin)中，靜置15分鐘待其(qi)*溶解后輕 輕混勻(濃度為1000pg/ml)，然后按照以(yi)下濃度：250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.9 pg/ml進行稀 釋。復溶過的標準(zhun)(zhun)品(pin)原液（1000pg/ml）未用完的應廢棄或根據需要按照一次用量分裝，并(bing)將其(qi)貯存在-20～ -80℃冰箱，具(ju)體(ti)如下圖(tu)。

4. 生物素(su)化抗體工作液：預先(xian)計算好試(shi)驗所(suo)需用(yong)量(liang)，用(yong)檢(jian)測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃(nong)縮液稀釋成1倍

應用工作(zuo)液（稀釋前充分混勻(yun)），請在30分鐘內加入到(dao)反應孔中。

5. 酶結合物工(gong)(gong)作液：按每次試驗(yan)所需用量配(pei)制，用酶結合物稀釋(shi)液（SR3）將100倍(bei)(bei)濃縮酶結合物稀釋(shi)成1 倍(bei)(bei)應用工(gong)(gong)作液（稀釋(shi)前(qian)離心），請在30分鐘內使(shi)用。

6. 洗滌方(fang)法(fa)： 

自動洗板(ban)：甩盡(jin)酶標板(ban)孔中液(ye)體，在厚迭吸(xi)水紙(zhi)上拍干，注(zhu)入洗滌(di)液(ye)為(wei) 300ul/孔,注(zhu) 與(yu)吸(xi)出(chu)間隔為(wei) 30 秒，洗板(ban) 5 次。 

手(shou)工洗(xi)板(ban)：甩盡酶標板(ban)孔中液(ye)體，在厚(hou)迭吸(xi)水紙上拍干，用洗(xi)瓶加入(ru)洗(xi)滌液(ye) 300ul/孔，靜止 30 秒后甩 凈酶標板(ban)孔中液(ye)體，在厚(hou)迭的吸(xi)水紙上拍干，洗(xi)板(ban) 5 次(ci)。

結果判斷：

1.用(yong)酶標儀 450 nm 波長測定(ding) OD 值。選擇雙(shuang)波長檢(jian)測，參考(kao)波長為 630 nm。如不能進(jin)行雙(shuang)波長檢(jian)測，請(qing) 用(yong) 450 nm 的 OD 測定(ding)值減去 630 nm 的 OD 測定(ding)值。

2.計算標(biao)準(zhun)品(pin)、樣品(pin)的(de)平均 OD 值：每個標(biao)準(zhun)品(pin)和標(biao)本的(de) OD 值應減去零孔的(de) OD 值

3.以標(biao)(biao)準品濃(nong)度為橫坐標(biao)(biao)，吸光度OD值(zhi)為縱(zong)坐標(biao)(biao)，用軟件繪制標(biao)(biao)準曲(qu)線，樣品中IL-2含量可通過對應OD 值(zhi)由標(biao)(biao)準曲(qu)線換算(suan)出相(xiang)應的濃(nong)度。

4.若(ruo)標本(ben) OD 值(zhi)高于標準曲(qu)線上(shang)限，應做適當(dang)稀釋后重新檢測，計算(suan)濃(nong)度時再乘(cheng)以稀釋倍數(shu)。

1. 數據及標準曲線

本圖僅供參考，應以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算人 IL-2 的樣本含量

 

2. 靈敏度：
低可檢測人 IL-2 濃度達 2pg/ml，
20 個零標準品濃度 OD 的平(ping)均值加上兩個標準差，計算相應的可檢測(ce)濃度。

3. 特異性：

不與人 IL-2、4、6、8、10 反(fan)應(ying)，小(xiao)鼠 IL-2、4、6、8 等反(fan)應(ying)。

4. 重復性：
板內(nei)，板間變(bian)異(yi)系數<10%。

5. 回收率：
在選取的(de)健康(kang)人血(xue)漿、細胞培養上清中(zhong)加(jia)入 3 個(ge)不同濃度水平的(de)人 IL-2，計(ji)算回收率。

6. 線性稀釋：

分別在選取的(de) 4 份健康人(ren)血漿和細胞培養上(shang)清中加入高(gao)濃度人(ren) IL-2，在標準(zhun)曲線(xian)動力學(xue)范圍內進(jin)行稀 釋，評估線(xian)性。