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Hoechst 33258染色液（即用型）：Hoechst 33258，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。Hoechst 33258的大激發波長為346nm，大發射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發波長為352nm，大發射波長為461nm。本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。
Hoechst 33258染色液（即用型）使用說明：

1. 對于固定(ding)的細(xi)胞或組織(zhi)：

a. 對(dui)于(yu)細胞或組織樣品(pin)，固定后，適(shi)當洗滌(di)去除固定劑。隨后如果需要(yao)進(jin)行(xing)免疫(yi)熒光染(ran)色(se)，則行(xing)免疫(yi)熒光染(ran)色(se)，染(ran)色(se)完畢后再按后續步(bu)驟進(jin)行(xing)Hoechst 33258染(ran)色。如果不需要進行其它(ta)染(ran)色，則直接(jie)進行后續的Hoechst 33258染色。

b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入(ru)少量Hoechst 33258染(ran)色液(ye)，覆蓋住樣品即可；對于懸浮細胞，少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

c. 吸除(chu)Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或(huo)生理鹽(yan)水洗滌2-3次，每次3-5分鐘(zhong)。

d. 直(zhi)接(jie)在熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)(cha)或(huo)封(feng)片后熒光顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察(cha)(cha)。細(xi)(xi)胞(bao)發(fa)生凋亡時，會看到凋亡細(xi)(xi)胞(bao)的細(xi)(xi)胞(bao)核呈(cheng)致密濃染，或(huo)呈(cheng)碎塊狀致密濃染。

2. 對于(yu)活細胞或組織：

a. 加入適當(dang)量Hoechst 33258染(ran)色液，必(bi)須充分覆蓋(gai)住待染(ran)色的樣品，通常(chang)對(dui)于六孔板一個孔需加入1ml染(ran)色液(ye)，對于96孔板一個孔需加(jia)入100微升染色液。

b. 在適宜于細胞培養的(de)溫(wen)度下培養20-30分(fen)鐘(zhong)。棄染色(se)液(ye)，用PBS或培養液(ye)洗滌2-3次即可進行熒光(guang)檢測。

相關文(wen)獻(xian)：

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《Protein kinase Cα inhibits myocardin-induced cardiomyocyte hypertrophy through the promotion of myocardin phosphorylation》 作者:Weizong Li,  Nan Wang,  Man Li,  Huiqin Gong,  Xinghua Liao, Xiaolong Yang , Tongcun Zhang 期刊:Acta Biochimica et Biophysica Sinica 影響因子:1.807 PMID:26206583