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基因工程(cheng)試劑 BL21（DE3）感受態(tai)細(xi)胞(bao)
貨號：C1400
規格：10×100ul / 20×100ul
保存：-70℃保(bao)存，運(yun)輸為干冰包裝。自收貨之(zhi)日起液氮保(bao)存少一年，-70℃保(bao)存少 6 個月。

產品簡介：
本公司生產的BL21（DE3）感受態細胞是采用大腸桿菌BL21（DE3）菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 10 7 ，-70℃保存 6 個月轉化效率不改變。
基因型：F_ ompT hsdSB（rB_mB_）dcm gal（DE3）
特 點：該菌(jun)(jun)株(zhu)用于(yu)高效表(biao)達(da)(da)克隆于(yu)含有噬(shi)菌(jun)(jun)體(ti)(ti) T7 啟動子的表(biao)達(da)(da)載體(ti)(ti)（如(ru) pET 系列）的基(ji)因。T7 噬(shi)菌(jun)(jun)體(ti)(ti)RNA 聚合(he)(he)酶位于(yu) λ 噬(shi)菌(jun)(jun)體(ti)(ti) DE3 區，該區整(zheng)合(he)(he)于(yu) BL21 的染色體(ti)(ti)上。該菌(jun)(jun)適合(he)(he)表(biao)達(da)(da)非(fei)毒性蛋(dan)白。

操作方法：  （以下各步驟均為無菌操作）
1、將感受態細胞置于冰上融化，以下實驗以 100ul 感受態細胞為例。
2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置 30 分鐘。
3、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養基，37℃ 180rpm 振蕩培養 1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、取適量(liang)已(yi)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)感受態(tai)細胞(bao)涂(tu)(tu)布(bu)(bu)含相(xiang)應(ying)抗生(sheng)素的(de)(de)(de)(de) SOC 或 LB 平(ping)板(ban)，37℃倒置培養(yang) 12-16 小(xiao)時。涂(tu)(tu)布(bu)(bu)用量(liang)可(ke)(ke)根據具體實(shi)驗來調整，如轉(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de) DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)多(duo)(duo)，可(ke)(ke)取 100ul 左右(you)的(de)(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)產物(wu)涂(tu)(tu)板(ban)；反(fan)之，如轉(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de) DNA總(zong)量(liang)較(jiao)少(shao)(shao)，可(ke)(ke)取 200-300ul 的(de)(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)產物(wu)涂(tu)(tu)板(ban)。過多(duo)(duo)菌(jun)液(ye)可(ke)(ke)以抑制細菌(jun)生(sheng)長。如果(guo)(guo)預計的(de)(de)(de)(de)克(ke)隆較(jiao)少(shao)(shao)，可(ke)(ke)通過離(li)心后吸(xi)除部分(fen)培養(yang)液(ye)，懸(xuan)浮菌(jun)體后將其涂(tu)(tu)布(bu)(bu)于(yu)一個平(ping)板(ban)中。涂(tu)(tu)布(bu)(bu)剩余的(de)(de)(de)(de)菌(jun)液(ye)可(ke)(ke) 4℃保(bao)存(cun)，如果(guo)(guo)次日的(de)(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)化(hua)(hua)菌(jun)落(luo)數(shu)過少(shao)(shao)可(ke)(ke)以將剩下的(de)(de)(de)(de)菌(jun)液(ye)再涂(tu)(tu)布(bu)(bu)新的(de)(de)(de)(de)平(ping)板(ban)。

注意事項：
1、感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板 DNA 總量。
5、為防止轉化實驗不(bu)成功，可以(yi)保留部分連(lian)接產(chan)物(wu)，以(yi)重新轉化，將損失降到低(di)。

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基因工程試劑 BL21（DE3）感受態(tai)細胞訂購說明：
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運輸說明：
1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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