国产品无码一区二区三区在线蜜桃_人妻精品久久久久中文字幕_av无码免费一区二区三区_久久久久av无码免费网

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒說明書（分光(guang)光(guang)度法）

貨號：BC0090

規格：50管/48樣

產品簡(jian)介：

POD廣泛(fan)存在于(yu)動(dong)物、植物、微生(sheng)物和培養(yang)細胞中，可催(cui)化過氧化氫氧化酚(fen)類和胺類化合(he)物，具有消除過氧化氫和酚(fen)類、胺類毒(du)性的雙重作用。

試(shi)驗(yan)中所(suo)需的(de)儀器(qi)和試(shi)劑(ji)：

可見(jian)分光光度(du)計、臺式離心(xin)機(ji)、可調(diao)式移液(ye)器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和(he)蒸餾(liu)水(shui)

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒產品內容：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保(bao)存；

試劑一(yi)：液體(ti)60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體(ti)×2瓶，4℃保存(cun)；用時每瓶加入5mL試劑一，現(xian)配現(xian)用；

試劑三(san)：液體10mL×1瓶(ping)，4℃保存。

操作步驟：

一(yi)、粗酶液提取：   

1、細菌(jun)、細胞(bao)或組織樣品的制(zhi)備   

收(shou)集細菌或細胞到離心(xin)管內，離心(xin)后(hou)棄上(shang)清；按(an)照每(mei)500萬(wan)細菌或細胞加入1ml提取液，超(chao)聲波破(po)碎細(xi)菌或細(xi)胞（功率200w，超(chao)聲3秒，間隔10秒。重復30次）；8000g 4℃離心(xin)10分鐘，取上清，置冰(bing)上待測。

稱取(qu)約0.1g組織，加入(ru)1mL提取(qu)液(ye)進行冰浴(yu)勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取(qu)上清(qing)，置冰(bing)上待測。

2、血清（漿(jiang)）樣品：直接檢測。

二、POD測定操(cao)作表 

測定前將試劑一、二和三 37℃（哺乳動(dong)物(wu)(wu)）或25℃（其他物(wu)(wu)種）放置10min。在1mL玻璃比色皿中按順序加入(ru)上述試劑，加入(ru)樣本后立即混勻并(bing)計時，記錄470nm下30s時的吸光值A1和1min30s后的吸光(guang)值A2。計算ΔA=A2-A1

注意：如果ΔA小于0.005，可將反應時間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將(jiang)樣(yang)本提(ti)取液稀釋(shi)后測定，計算公(gong)式中乘以(yi)相(xiang)應的稀釋(shi)倍數

POD活性計算：   

1、血清（漿）POD活力的計算(suan):

單位(wei)的定(ding)義：每mL血清（漿）在反(fan)應體系中每分鐘使A470變(bian)化0.01定義為(wei)一個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

POD（U/L）＝反應總體積（1070ul）÷樣本(ben)體積（15ul）÷0.01×ΔA=7133×ΔA

2、組織POD活(huo)力計算：

（1）按樣(yang)本蛋(dan)白濃度計算：

單位的定(ding)義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘使(shi)A470變化(hua)0.01定義為一個酶(mei)活(huo)力(li)單位。

POD（U/mg prot）＝反應總體積（1070ul）÷樣本(ben)體積（15ul）÷0.01×ΔA÷樣本蛋白濃度(mg/ml)=7133×ΔA÷樣本蛋白濃(nong)度(mg/ml)

（2）按(an)樣本鮮重(zhong)計算：

單(dan)位的定義(yi)：每g組織在反應體系(xi)中每分鐘使A470變(bian)化0.01定(ding)義為一個(ge)酶活力單位。

POD（U/g mass）＝反應總體(ti)積（1070ul）÷樣(yang)本體(ti)積（15ul）÷0.01×ΔA÷樣本質(zhi)量=7133×ΔA÷樣本質量

3、按細菌或細胞密(mi)度(du)計算：

單(dan)位的定義：每1萬個細(xi)(xi)菌或(huo)細(xi)(xi)胞在反應體系中每分鐘(zhong)使(shi)A470變化0.01定義(yi)為一個酶活力單位。

POD（U/10⁴ cell）＝反應總體(ti)積(ji)（1070ul）÷樣本(ben)體(ti)積(ji)（15ul）÷0.01×ΔA÷500（10⁴ cell /mL）=14.27×ΔA