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脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）說明書

貨(huo)號:BC0255

規格: 100T/96S

脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）?產品簡介：

HYP是(shi)機體膠(jiao)原(yuan)蛋白主要成分之一，膠(jiao)原(yuan)蛋白大多(duo)分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組(zu)織(zhi)代謝及纖(xian)維化(hua)程度的一項重要指標。

樣(yang)品(pin)經水解(jie)產(chan)生(sheng)游離的HYP，進一補被氯胺T氧化，氧化產(chan)物與對二甲(jia)氨(an)基苯甲(jia)醛(quan)反應，產(chan)生(sheng)紅色化合(he)物，在(zai)560nm處有(you)特征吸收峰。通過(guo)測定樣品水解(jie)液560nm吸光(guang)值(zhi)，可計算HYP含量(liang)。

產品內容：

組(zu)織提取液：6mol/L鹽酸，自備。濃(nong)鹽酸：H2O（V/V）= 1:1，室溫保存； 

細(xi)胞(bao)提取(qu)液：液體(ti)100mL×1 瓶，4 ℃保(bao)存；  

試(shi)劑一：液體10mL×1 瓶(ping)，4 ℃避光保(bao)存；  

試(shi)劑二：液體10mL×1 瓶(ping)，4 ℃避光(guang)保存(cun)。

脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）操作步驟：

一(yi)、羥(qian)脯(fu)氨酸(suan)提取：  

1. 組織：取(qu)約0.2g 樣(yang)品于(yu)玻璃管，加入2mL的(de)組提取液，置于110℃烘箱，水解612小時，16000rpm，25℃，離心20min，用提取液定容2mL，取上清待測。  

2.  細(xi)胞(bao)：取(qu)約500 萬個細胞，加(jia)入1mL 的細胞(bao)提取(qu)液(ye)，于高(gao)壓消毒(du)器中15 磅保持(chi)30min，自然降(jiang)壓后待測(ce)。

二(er)、測定操作：

羥脯氨酸含量計算(suan)：

用微量(liang)比色皿測定的計(ji)算公式:

標(biao)準曲(qu)線：y=64.875x+ 0.0251，R²=0.9991  

（1）按(an)組織計(ji)算(suan)  

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W)  

                         =0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按(an)細胞計算：

HYP含(han)量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷64.875×;V 反總(zong)÷V 樣×V 樣總(zong)÷細胞數量（萬(wan)個）

=0.077×（A₅₆₀-0.0251）÷細(xi)胞數量（萬(wan)個）

V反總：反應體系總體積，0.3mL； V樣(yang)：反應中樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.06mL；V樣(yang)總(zong)：加入提取液體(ti)積，mL； W：樣(yang)本質(zhi)量，g。

用96孔板測定的計算(suan)公式如下:

標準曲線：y=32.4375x+ 0.0251，R²=0.9991  

（1）按組(zu)織計算  

HYP含(han)量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反總÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W)  

     ;                    =0.308×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按細(xi)胞計(ji)算：

HYP含量(liang)（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反總(zong)÷V 樣×V 樣總(zong)÷細胞數量（萬個）

=0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷細胞數量（萬個(ge)）  

V反總：反應(ying)體系總體積，0.3mL； V樣：反應中樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，mL； W：樣本質量，g。

注意事項：

1、OD值大于0.8，樣品適(shi)當稀釋再測定，注意計算公(gong)式里乘以稀釋倍數。

2、試(shi)劑有一定的毒性，請操作時(shi)做(zuo)好防護措施(shi)，防止吸入(ru)或與(yu)皮(pi)膚接觸。