国产品无码一区二区三区在线蜜桃_人妻精品久久久久中文字幕_av无码免费一区二区三区_久久久久av无码免费网

說明：蛋白質合成抑制劑。抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞生長。
別名：二鹽酸嘌呤霉 素；
3'-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3'-deoxy-N,N dimethyladenosine dihydrochloride
分子式：C22H29N7O5·2HCl 分子量：544.43
CAS＃：58-58-2
外觀：白色或白中帶有黃色的粉末
特性：來源：Streptomyces alboniger 純度(assay):≥98%(TLC)
溶解性：溶于水，參考濃(nong)度50mg/ml。

說明：蛋白質(zhi)合成抑制劑。抑制細菌(jun)、藻類(lei)原生物(wu)和哺(bu)乳(ru)動物(wu)細胞生長。

嘌呤霉 素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有的不成熟多肽。

嘌呤霉 素(su)產生菌Streptomyces alboniger內(nei)發(fa)現的(de)pac基因編碼N-乙酰轉移酶（PAC），賦予機體對產生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質粒的(de)哺乳動(dong)物穩定轉染(ran)細胞株。

嘌呤霉 素在(zai)細(xi)胞(bao)穩轉(zhuan)株篩選中的普遍應用與慢(man)病(bing)毒載(zai)體的特性有關，現(xian)在(zai)商業(ye)化的慢(man)病(bing)毒載(zai)體多(duo)數都(dou)攜(xie)帶(dai)pac基(ji)因(yin)。在(zai)某些(xie)特定情況下，嘌呤霉 素亦(yi)可以用來(lai)篩選轉(zhuan)化攜(xie)帶(dai)pac基(ji)因(yin)質粒的大腸(chang)桿(gan)菌(jun)菌(jun)株。

 說明：蛋白質合成抑制劑。抑制細菌、藻類原生物和哺乳動物細胞生長。
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素產生菌Streptomyces alboniger內發現的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉移酶（PAC），賦予機體對嘌呤霉素產生抗性。這一特性如今普遍應用于篩選特定攜帶pac基因質粒的哺乳動物穩定轉染細胞株。
嘌呤霉素在細胞穩轉株篩選中的普遍應用與慢病毒載體的特性有關，現在商業化的慢病毒載體多數都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來篩選轉化攜帶pac基因質粒的大腸桿菌菌株。
溶解性：溶于水，參考濃度50mg/ml。
使用方法
1.建議使用濃度
哺乳動物細胞：1-10 μg/mL，濃度需要殺滅曲線來確定；
大腸桿菌：LB瓊脂培養基篩選穩定轉化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125μg/mL。注：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩轉株需要的pH值調節，而且受宿主細胞本身的影響。
2.溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，經0.22 μm濾膜過濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲存液。
3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定（以shRNA轉染或者慢病毒轉導為例）
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝情況及細胞所處細胞周期位置等有關。為了篩選到穩定表達的shRNA細胞株，確定殺死未轉染/轉導細胞的低濃度嘌呤霉素關重要。建議初次做實驗的客戶一定要建立適合自身實驗體系的殺死曲線（kill curve）。
1） Day 1：24孔板內以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板，鋪足夠量的孔以進行后續的梯度實驗。37℃細胞孵育過夜；
2） Day 2：a）準備篩選培養基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養基（如0-15μg/mL，少5個梯度）；b）往孵育過夜后的細胞內更換新鮮配制的篩選培養基；之后37℃孵育細胞；
3） Day 4：更換新鮮的篩選培養基，并觀察細胞存活率。
4） 根據細胞的生長狀態，約2-3天更換新鮮的篩選培養基；
5） 每日監測細胞，觀察存活細胞率，從而確定抗生素篩選開始4-6天內有效殺死非轉染或者所有非轉導細胞的藥物低濃度。
4. 哺乳動物穩定轉染細胞株的篩選
等轉染含有pac基因的質粒后，細胞在含有嘌呤霉素的培養基中增殖，以篩選出穩定轉染子。
1）細胞轉染48h后，將細胞（原樣或稀釋）置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養基中培養。
注意：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用。細胞過于密集，抗生素產生的效力會明顯下降。進行細胞分盤使其密度不超過25%。
2）每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養基。
3）篩選7天后評估細胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時間，這依賴于宿主細胞系和轉染篩選效率。注意：每日進行細胞生長狀態的觀察。嘌呤霉素的篩選少需要48h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4）轉移和放置5-10個抗性克隆到一個35mm的培養(yang)皿(min)中，用(yong)選擇培養(yang)基繼續培養(yang)7天(tian)。此(ci)次富(fu)集培養(yang)是(shi)為日后的細(xi)胞毒性實驗做準備。

參考文獻：
《CRISPR-Cas9 Mediated RNase L Knockout Regulates Cellular Function of PK-15 Cells and Increases PRV Replication》 作者:Chao Sui, Dandan Jiang, Xiangju Wu, Xiaoyan Cong, Feng Li, Yingli Shang, Jinqiu Wang, Sidang Liu, Hu Shan, Jing Qi, and Yijun Du 期刊:BioMed Research International 影響因子:2.197 PMID:30941371
《miR-196a-5p promotes metastasis of colorectal cancer via targeting IκBα》 作者:He Xin, Chuanzhuo Wang and Zhaoyu Liu 期刊:BMC Cancer 影響因子:3.288 PMID:30621631