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1M Hepes（pH7.2-7.4）

 HEPES緩沖液是細胞培養實驗中經常用到的緩沖液。在開放式的培養條件中，加入HEPES緩沖液，可防止培養基內pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。那么，HEPES緩沖液的配制步驟和方法是怎樣的，下面就給大家詳細介紹。
HEPES分子量為238.31，分子式: C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/rna提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L。
關于HEPES 緩沖溶液的配制，不同的文獻資料有不同的說法。根據用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結如下：
一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調節少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容500ml，于4攝氏度保存。
二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值，后定容。
三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制
將(jiang)1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解(jie)在90ml的蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水，用(yong)0.5M NaOH調節所需(xu)pH值，再用(yong)蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水定容100ml即可(ke)。

用途(tu)：對細胞無毒(du)性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能(neng)較長(chang)時間控(kong)制恒(heng)定的pH范圍。使用終濃(nong)度為(wei)10-50mmol/L，一般培養(yang)液內含(han)20mmol/LHEPES即(ji)可達到緩沖能(neng)力。

細(xi)胞培養(yang)常用10mmol/L。

1M Hepes（pH7.2-7.4）

10mmol/L HEPES緩沖液(ye)配(pei)制(zhi)方法如(ru)下(xia)：準(zhun)確稱取HEPES 2.383g，加入新鮮三蒸水定(ding)容1L。過(guo)濾除(chu)菌，分裝后4℃保(bao)存。如(ru)果用于(yu)加入細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)作緩沖劑，建議培(pei)(pei)養(yang)液(ye)避(bi)光(guang)保(bao)存，因(yin)為有(you)(you)研究報道(dao)培(pei)(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)(zhong)的HEPES在(zai)可見光(guang)下(xia)暴(bao)露3h以上將產(chan)生對細(xi)胞有(you)(you)毒(du)性的過(guo)氧化氫。

HEPES 即(ji)羥乙(yi)基呱嗪乙(yi)硫磺(huang)酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ）是一種(zhong)氫離子緩(huan)(huan)沖劑(ji)，能(neng)較長(chang)時間(jian)控制(zhi)恒定(ding)的(de) pH 范圍。有效緩(huan)(huan)沖范圍為 pH6.8-8.2。常用于配制(zhi)蛋白(bai)提取緩(huan)(huan)沖液、細胞培(pei)養用緩(huan)(huan)沖液等(deng)。

HEPES 用于(yu)細胞(bao)(bao)培(pei)養時使(shi)用終濃度為 10-25mM， 在開放式培(pei)養或細胞(bao)(bao)觀(guan)察時能維(wei)持較恒定的(de) PH 值。索(suo)萊寶生產(chan)的(de) HEPES 緩沖液(ye)均經(jing)過(guo)無菌處理，可直接(jie)用于(yu)細胞(bao)(bao)培(pei)養。4℃保存可延長產(chan)品(pin)保質期，長期不用建議低溫保存。

參考文獻：

《miR‐377‐5p inhibits lung cancer cell proliferation, invasion, and cell cycle progression by targeting AKT1 signaling》 作者:Han Wu, HaiYan Liu, WenJie Liu, YongLi Shi, Dawei Bao 期刊:Journal of Cellular Biochemistry 影(ying)響因(yin)子:3.448 PMID:30485528

《Traditional Herbal Medicine-Derived Sulforaphene LFS-01 Reverses Colitis in Mice by Selectively Altering the Gut Microbiota and Promoting Intestinal Gamma-Delta T Cells》 作者:Ming Li, Jiali Gao, Yan Tang, Meishuo Liu, Sijin Wu, Kunli Qu, Xiangyu Long, Huajun Li, Min Li, Yinhui Liu, Jieli Yuan, Lei Mao, Yu Liu, Xiliang Zheng, Erkang Wang, Jin Wang and Yongliang Yang 期刊:Frontiers in Spotlight 影響因子:4.259 PMID:29375374
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