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2,3,5氯化三苯基四氮唑 TTC

2,3,5-氯化三苯基四氮唑，又稱四唑紅(hong)，簡稱TTC，TTZ，或(huo)TPTZ，一種脂(zhi)溶性光敏感復合(he)物(wu)，即可(ke)用來(lai)檢(jian)(jian)測種子的(de)(de)生存能力，也可(ke)用來(lai)檢(jian)(jian)測哺乳動物(wu)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)的(de)(de)缺血(xue)(xue)梗(geng)塞(sai)。檢(jian)(jian)測機制(zhi)在于(yu)(yu)TTC本(ben)身可(ke)作(zuo)為(wei)一種氧化還原指(zhi)示(shi)劑，活細胞內(nei)的(de)(de)脫(tuo)氫(qing)酶（尤(you)其(qi)是線粒體內(nei)的(de)(de)琥珀酸脫(tuo)氫(qing)酶）可(ke)以將(jiang)TTC還原為(wei)紅(hong)色(se)(se)(se)甲臢化合(he)物(wu)TPF（1,3,5-triphenylformazan）。對于(yu)(yu)種子或(huo)者(zhe)植物(wu)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)來(lai)說(shuo)，染(ran)色(se)(se)(se)結果(guo)為(wei)活組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)被(bei)染(ran)成不(bu)同程度的(de)(de)紅(hong)色(se)(se)(se)，死組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)或(huo)者(zhe)無生命(ming)力的(de)(de)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)不(bu)著色(se)(se)(se)。對于(yu)(yu)缺血(xue)(xue)梗(geng)塞(sai)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，因(yin)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)壞死脫(tuo)氫(qing)酶活力喪失呈現蒼(cang)白(bai)色(se)(se)(se)，而正常(chang)(chang)組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)呈深(shen)紅(hong)色(se)(se)(se)。TTC常(chang)(chang)用的(de)(de)染(ran)色(se)(se)(se)濃度為(wei)2%（w/v）(貨號：G3005)，也可(ke)根據組(zu)(zu)織(zhi)(zhi)類型做濃度的(de)(de)適(shi)當調整(zheng)。

染色方法

1.1  染色工作液的配制

TTC通常用(yong)磷酸緩(huan)沖鹽溶液來配制，pH范圍為6.5-7.5之間，常用(yong)的(de)工作濃度為2%，也可用(yong)1%或者更低的(de)濃度，根據自身實驗(yan)體系調整(zheng)。

可使用(yong)以下的緩沖鹽(yan)體系配制：

1）取9.078g KH2PO4（Mw：136.09）溶(rong)于(yu)1L去(qu)(qu)離(li)子(zi)水(shui)內，制備成66.7mM KH2PO4儲(chu)存(cun)(cun)液(ye)(ye)(ye)；取9.472g Na2HPO4·H2O（Mw：137.99）溶(rong)于(yu)1L去(qu)(qu)離(li)子(zi)水(shui)內，制備成68.6mM Na2HPO4儲(chu)存(cun)(cun)液(ye)(ye)(ye)；將兩份KH2PO4儲(chu)存(cun)(cun)液(ye)(ye)(ye)與1份Na2HPO4儲(chu)存(cun)(cun)液(ye)(ye)(ye)充分混合(he)，即得到需要的(de)磷(lin)酸(suan)緩沖(chong)液(ye)(ye)(ye)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)。

2）根據需(xu)要的(de)(de)(de)TTC工(gong)作(zuo)(zuo)液濃度(du)來制備，如加入2g TTC粉末到100ml混合的(de)(de)(de)磷(lin)酸(suan)鹽(yan)緩沖(chong)液中(zhong)，即得到2%的(de)(de)(de)染(ran)色(se)工(gong)作(zuo)(zuo)液。此(ci)時的(de)(de)(de)溶液pH值在(zai)6.5-7.5之(zhi)間。此(ci)工(gong)作(zuo)(zuo)液可(ke)裝到不透明的(de)(de)(de)白(bai)色(se)瓶或者棕(zong)色(se)瓶子內(nei)，4℃保存幾個(ge)月穩(wen)定。

【注意：TTC染色(se)液(ye)的(de)緩沖體系可(ke)根據自己的(de)實驗習慣來調整；也(ye)可(ke)用(yong)去離子水來溶(rong)解配置成10mg/ml的(de)儲(chu)存(cun)液(ye)，過濾(lv)除菌，建議(yi)此法染色(se)液(ye)當天(tian)使用(yong)。】

1.2 染色(se)方法（動物組(zu)織）

1）取新(xin)(xin)鮮(xian)組織切片(pian)放到裝有(you)TTC染色(se)(se)液(ye)的染色(se)(se)容器內(nei)，37℃避光孵育(yu)15-30min，邊(bian)(bian)孵育(yu)邊(bian)(bian)觀(guan)察顏色(se)(se)變化(hua)；【注意(yi)：TTC染色(se)(se)液(ye)可(ke)重復使用2-3次，可(ke)將用過的TTC染色(se)(se)液(ye)放到新(xin)(xin)的容器內(nei)繼續使用。】

2）【可選(xuan)】輕柔的吸(xi)取(qu)緩沖液（如(ru)1×PBS）將組織(zhi)表面(mian)多余的染色液沖洗掉；

3）此時即可觀(guan)察或者(zhe)拍照(zhao)。若需長久保存，用4%多聚甲醛溶液（貨號：P1110）固(gu)定10-20min。

注意事項

1）本品具有微量的光和熱敏感性(xing)，使用以及(ji)存放的過程中避(bi)免長時間曝光或者接(jie)觸到過高溫度下。

2）為了您(nin)的安全和健康(kang)，請(qing)穿實(shi)驗服并戴(dai)一次性手套操作。

參考文獻：
《Regulation of VDAC1 contributes to the cardioprotective effects of penehyclidine hydrochloride during myocardial ischemia/reperfusion》 作者:Duomao Lin,Boqun Cui,Jiayue Ren,Jun Ma 期刊:Experimental Cell Research 影響因子:3.309 PMID:29630893
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
《The IRE1 signaling pathway is involved in the protective effect of low-dose LPS on myocardial ischemia-reperfusion injury》 作者:Ting Wu,Nan Jiang,Zhenhua Ji,Guoyu Shi 期刊:Life Sciences 影響因子(zi):3.448 PMID:31202841

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