Caspase-3活性測定試劑盒 Caspase-3是凋(diao)亡(wang)(wang)過程(cheng)中主要(yao)的(de)終末剪切(qie)酶,因而也是研究多(duo)的(de)caspase,它(ta)激(ji)活(huo)pro-caspase-2,6,7,9等(deng),特(te)異(yi)水解(jie)(jie)多(duo)種凋(diao)亡(wang)(wang)關鍵蛋白如(ru)PARP,介導細胞核染色(se)(se)質固縮、凋(diao)亡(wang)(wang)小(xiao)體生成、核DNA斷裂。試(shi)劑盒測定(ding)原理基于(yu)Caspase-3特(te)異(yi)水解(jie)(jie)多(duo)肽(tai)底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide (Ac-DEVD-pNA),釋放硝基苯(ben)胺pNA。游離硝基苯(ben)胺pNA呈黃色(se)(se)在405 nm具有大吸收峰(feng),用普通(tong)可見光(guang)分光(guang)光(guang)度比色(se)(se)方法(fa)測定(ding)。根據pNA標準管吸光(guang)度OD值和標準曲(qu)(qu)線,計算(suan)來自底物肽(tai)釋放的(de)pNA濃度,得到Caspase-3水解(jie)(jie)活(huo)性。反應體系100微升(sheng),試(shi)劑盒提供(gong)的(de)試(shi)劑,除標準曲(qu)(qu)線外可進行50或100次樣品測定(ding)。
適用:測定哺乳動物組織(zhi)、細(xi)胞caspase-3活性。
組成與(yu)儲存(cun): 1. 裂解(jie)緩沖(chong)液: 20 ml ,4 ºC 2. 反應緩沖液: 10 ml ,4 ºC 3. 2 mM Ac-DEVD-pNA底物: 0.5 ml,-20 ºC避光 4. 10 mM pNA標準品: 0.5 ml,-20 ºC避光 以(yi)上標出的(de)量(liang)為100次(ci)檢測(ce),50次(ci)檢測(ce)的(de)試(shi)劑量(liang)減半。試(shi)劑常溫運輸。到達后按(an)要求儲存,1年內穩定。
所需儀器: 酶(mei)標(biao)儀(yi)與96孔(kong)酶(mei)標(biao)板;或(huo)可(ke)見光分(fen)光光度計(ji)配(pei)100μl容積的石(shi)英(ying)比色杯。 工作波長:大吸收(shou)波長405 nm,如不具備也可在400~450 nm范圍內測定(ding)。 Caspase-3活性測定試劑盒 |