產品(pin)名稱:: 谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒產品英文名(ming): Glutamic Acid Dehydrogenase(GDH)Assay Kit產(chan)品貨號:BC1460 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓(lou)產品規格:50管/48樣 產品商(shang)標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考(kao)價格:650 庫存狀態:現貨 關鍵字: 谷氨酸脫(tuo)氫酶檢(jian)測試劑盒|GDH檢測試(shi)劑盒|谷氨酸脫氫酶(mei)|試(shi)劑盒
簡要(yao)介紹: GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分(fen)布于植(zhi)物(wu)中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共(gong)同參與谷氨酸的合成,在氨同化(hua)(hua)和轉化(hua)(hua)成有機氮化(hua)(hua)合物(wu)的代謝中起(qi)重(zhong)要作用(yong)。 GDH催化NH4+、α-酮戊二酸(suan)(suan)和NADH,生成谷氨酸(suan)(suan)和NAD+,引起340nm吸光度(du)下降。通過測定340nm吸光度(du)的下降速率(lv),計算GDH活(huo)性(xing)。
產品(pin)詳細描述 產品內容(rong): 提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存; 試(shi)劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存; 試(shi)劑(ji)二:粉(fen)劑(ji)×1瓶(ping),-20℃保存。 產品說明: GDH(EC 1.4.1.2)廣(guang)泛分布(bu)于(yu)植物(wu)中,和谷氨酸(suan)合成酶(mei)(GOGAT)共同(tong)參與谷氨酸(suan)的合成,在氨同(tong)化和轉化成有機氮化合物(wu)的代謝(xie)中起重要(yao)作用。 GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和(he)NADH,生成谷氨酸和(he)NAD+,引起340nm吸(xi)光度下降。通過測(ce)定340nm吸(xi)光度的下降速率,計算GDH活性。 需自備的儀器和用(yong)品(pin): 紫外分光光度計、臺式離(li)心機、水浴(yu)鍋、移液器(qi)、1mL石英比色皿(min)、研(yan)缽、冰和蒸餾水。 操(cao)作步驟: 一(yi)、粗酶(mei)液提取: 1、收集細菌(jun)或(huo)細胞到離心管(guan)內,離心后(hou)棄(qi)上清;按照每500萬細菌(jun)或(huo)細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌(jun)或(huo)細胞(功(gong)率20%,超聲3秒,間隔10秒,重(zhong)復(fu)30次);8000g4℃離(li)心10分鐘(zhong),取上(shang)清,置冰上(shang)待測。 2、稱取(qu)約(yue)0.1g組(zu)織,加(jia)入1mL提取(qu)液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心(xin)10分鐘,取上清,置(zhi)冰上待測。 二、測定步驟: - 紫外分光光度計預熱30min以上,調節(jie)波(bo)長340nm,蒸餾(liu)水調零(ling)。
- 樣本測定
(1)工作液的配制:臨用前將試(shi)劑(ji)一加入試(shi)劑(ji)二(er)中混合(he)溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min; (2)取1mL工(gong)作液和0.05mL樣本(ben)于光(guang)(guang)(guang)徑為(wei)1cm的(de)1mL石(shi)英比色皿中,混勻,加樣本(ben)的(de)同(tong)時開始(shi)計時,在340 nm波長(chang)下記(ji)錄20秒(miao)(miao)時的(de)初始(shi)吸光(guang)(guang)(guang)度A1和5分20秒(miao)(miao)時的(de)吸光(guang)(guang)(guang)度A2,計算ΔA=A1-A2。注:當ΔA大于0.5時,將樣本(ben)進行稀釋后測(ce)量。 三、GDH活性計算: (1)按(an)樣本蛋白濃度計算: 單位的定(ding)義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADH定(ding)義為一個酶活力單位。 GDH(U/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=675×ΔA÷Cpr (2)按樣本(ben)鮮重計算: 單位的定義:每g組織(zhi)每分鐘(zhong)消耗1 nmol NADH定義為(wei)一個酶活力(li)單位。 GDH(U/g 鮮(xian)重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣(yang)÷V樣(yang)總×W)÷T=675×ΔA÷W (3)按細菌或細胞密度計算(suan): 單位(wei)(wei)的(de)定義(yi):每1萬個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞每分鐘(zhong)消耗1 nmol NADH定義(yi)為一個(ge)酶活(huo)力單位(wei)(wei)。 GDH(U/104 cell)=[ΔA×V反(fan)總÷(ε×d)×109]÷(V樣(yang)÷V樣(yang)總×500)÷T=1.35×ΔA V反總:反應體(ti)系(xi)總體(ti)積(ji),1.05×10-3 L;ε:NADH摩爾消(xiao)光系(xi)數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色(se)皿(min)光徑,1cm;V樣(yang)(yang)(yang):加入樣(yang)(yang)(yang)本體(ti)積(ji),0.05 mL;V樣(yang)(yang)(yang)總:加入提取液體(ti)積(ji),1 mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣(yang)(yang)(yang)本蛋白質濃度(du),mg/mL;W:樣(yang)(yang)(yang)品質量,g;500:細(xi)菌或細(xi)胞總數,500萬。
相關文獻: 《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作(zuo)者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30558146 谷氨酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒 |