產品(pin)名稱:谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒產(chan)品英(ying)文名:Glutathione Peroxidase (GPX) Assay Kit產品貨號:BC1190 產(chan)地(di):北京市通州區馬駒(ju)橋聯(lian)東U谷(gu)8三樓產品規格:50管/48樣(yang) 產品商標:solarbio 保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參(can)考價格:1600 庫存狀(zhuang)態(tai):現貨 關鍵字:谷胱甘肽過氧化物(wu)酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GPX含量(liang)檢測|試劑盒| 簡要介紹: 氧(yang)化(hua)(hua)(hua)型谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)(GSSG)是(shi)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)(GSH)的(de)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)形式,又稱為(wei)(wei)二硫(liu)代谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai),是(shi)兩分子的(de)谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)而成。GSSG會(hui)被谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)酶還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)成GSH,因此機體中大(da)多數是(shi)以(yi)(yi)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)型形式存在(zai)。測定(ding)細(xi)胞內(nei)GSH和GSSG含量(liang)(liang)以(yi)(yi)及GSH/GSSG比值,能(neng)夠很(hen)好地反(fan)映細(xi)胞所處的(de)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)狀態。本試劑盒利用谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)能(neng)和5,5’-二硫(liu)代-雙(shuang)-(2-硝基(ji)ben甲(jia)酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反(fan)應(ying)產生2-硝基(ji)-5-巰基(ji)ben甲(jia)酸,2-硝基(ji)-5-巰基(ji)ben甲(jia)酸在(zai)波長(chang)412nm處具有(you)大(da)光吸(xi)收的(de)特點,通過2-乙烯吡dian抑制樣品(pin)中原(yuan)(yuan)(yuan)有(you)的(de)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)型谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai),然后利用谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)酶將GSSG還(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)為(wei)(wei)GSH,借此測定(ding)氧(yang)化(hua)(hua)(hua)型谷(gu)胱(guang)(guang)甘(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)含量(liang)(liang)。
產品詳細描(miao)述 產品內(nei)容: 試(shi)劑一:液體×1瓶,4℃保存(cun)。 試(shi)劑二:粉劑×1瓶,4℃保存(cun)。 試劑三:液體×1支,-20℃保存(cun)。 試劑四:液體×1瓶(ping),4℃保存。 工(gong)作液(ye)配制:臨(lin)用前,在(zai)試劑二中加入試劑一40 mL,充分(fen)震(zhen)蕩溶解后加入全部試(shi)劑三(san),混勻。(當天用完) 產品說明: 谷胱(guang)甘肽過氧化物酶(mei)(glutathione peroxidase, GSH-Px)是谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)肽(tai)氧(yang)化(hua)還(huan)原循環(huan)中催化(hua)還(huan)原型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)肽(tai)(GSH)氧化的主要(yao)酶(mei)之一(yi)。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與(yu)ROS反(fan)應,生成(cheng)氧化(hua)型谷胱(guang)甘肽GSSG,從而(er)保護生物膜(mo)免受ROS的損(sun)害,維持細胞的正常(chang)功能;而且具有(you)保護肝臟、提高機體免疫力、拮抗(kang)有(you)害金屬離子對機體的傷害和增(zeng)加機體抗(kang)輻射(she)等(deng)能力。 GSH-Px催化H2O2氧化GSH,產生GSSG;谷胱甘肽還原酶(GR)催化(hua)NADPH還(huan)原GSSG,再(zai)生GSH,同時NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有(you)特(te)征吸收(shou) 谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)活性檢測試劑盒 自備儀器和用品: 紫外-可見(jian)分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diao)節移(yi)液器、1mL石英比(bi)色皿和(he)蒸餾水(shui)。 操作步驟: 一、粗酶液提(ti)取: - 組織(zhi):按照組織(zhi)質量(liang)(g):試劑一體積(mL)為(wei)1:5~10 的比例(建議稱(cheng)取0.1g 組織,加入1mL 試劑一)進行冰浴勻漿(jiang)。10000rpm,4℃離心10min,取(qu)上清(qing)置冰上待測(如(ru)上(shang)清不清澈,再(zai)離心3min)。
- 細菌、真菌:按(an)照(zhao)細胞數量(liang)104個:試劑一(yi)體積(ml)500~1000:1 的比(bi)例,建議500 萬細(xi)胞(bao)加入1mL 試劑一),冰浴超(chao)聲(sheng)波破碎細胞(功率300w,超(chao)聲(sheng)3 s,間隔7s,總時間3min)然(ran)后(hou)10000rpm,4℃,離心10min,取上(shang)清置冰上(shang)待測(如上清不(bu)清澈(che),再離心3min)。
- 血清等液體:直(zhi)接(jie)測定。
二、GSH-Px測定操作: 1. 分(fen)光光度計預熱30 min,調節(jie)波長到340 nm,蒸餾水調零。 2. 混合試(shi)劑在25℃或者37℃(哺乳動物)水浴中預熱(re)30min以上。 3. 空(kong)白管:依次在1mL石(shi)英比色皿中加(jia)入100μL蒸餾水、800μL預熱的(de)工作液,100μL試劑(ji)四,迅速混勻后于(yu)340nm處測(ce)定第10 s處的吸光值,37℃水浴(yu)3min后(hou)迅速拿出測量(liang)吸(xi)光度,分別記為A空1和A空2。計算△A空=A空1-A空2。(空白管只需做(zuo)1~2個) 4. 測定管(guan):依次在1mL石英比色皿中加入(ru)100μL上(shang)清(qing)液、800μL預熱的工作(zuo)液,100μL試劑四,迅速混勻后于340nm處測定(ding)第10 s處的吸光值,37℃水浴3min后迅速拿出測(ce)量吸(xi)光(guang)度,分別記為A測1和A測(ce)2。計算△A測=A測1-A測2。 三、GSH-Px活性計算: (1)按(an)蛋白濃度計算 GSH-Px活力(li)單位定(ding)(ding)義:一定(ding)(ding)溫度(du)下,每mg蛋(dan)白在反應體(ti)系中每(mei)分鐘催化1nmol NADPH氧化定(ding)義為一個酶活力(li)單位。 GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A測定管(guan)-△A空白(bai)管)÷ε÷d×V反總×106] ÷[Cpr×V樣]÷T =536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計算 GSH-Px活(huo)力單位(wei)定(ding)義:一定(ding)溫度中,每(mei)g樣(yang)品在反應體系中每分鐘催化1μmol NADPH氧化定義為一個酶活力(li)單位。 GSH-Px (U/g 鮮重(zhong))=[ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×106] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T =536×(△A測定管-△A空白管)÷W (3) 按細胞數量計算 GSH-Px 活力單位定(ding)義:一定(ding)溫(wen)度中,每104個細(xi)胞(bao)每分鐘(zhong)催化1μmol NADPH 氧化定義(yi)為一個(ge)酶活(huo)力單位。 GSH-Px (U/104 cell)=[(△A 測定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷(細胞數(shu)量×V 樣÷V樣(yang)總(zong))÷T =536×(△A 測定(ding)管(guan)-△A 空白管)÷細胞(bao)數量 (4) 按液體(ti)體(ti)積計算 GSH-Px 活力單位定義:一定溫度中,每毫(hao)升液體每分鐘催化1μmol NADPH 氧化(hua)定義為一個酶活力單位。 GSH-Px (U/ml)=[(△A 測(ce)定(ding)管(guan)-△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×109]÷V 樣÷T =536×(△A 測定管-△A 空(kong)白(bai)管) △A空(kong)白管=A空(kong)1-A空2;△A測定管=A測1-A測2。 ε:NADPH摩爾(er)消光系數6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總(zong):反應體系總(zong)體積,0.001 L;106:1 mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);V樣(yang):加入反(fan)應體系(xi)中上清液(ye)體積(ji),100μL =0.1 mL;T:反應時間,3 min;W :樣品質(zhi)量,g。 注意事(shi)項: (1)樣品處理等過程均需(xu)要在冰上進行(xing),且須在當(dang)日(ri)測(ce)定酶(mei)活力; (2)混合試(shi)劑(ji)和底物液須(xu)臨用前(qian)配(pei)制,配(pei)完后(hou)置于冰上; (3)測定(ding)過程(cheng)操作須迅(xun)速; (4)細(xi)胞中(zhong)GSH-Px活性(xing)測定時,細胞數目須在300萬-500萬之間(jian),細(xi)胞中GSH-Px的提取時可加(jia)試劑一后(hou)研磨或超(chao)聲波處(chu)理,不能用(yong)細胞(bao)裂解液(ye)處(chu)理細胞(bao)。
相關文獻: 《Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice》 作者:Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,He Ying,Cao Yixin ,Zhang Yongmin,Sun Wenjia,Qiao Boling,He Jiao 期刊:Phytomedicine 影響因子:4.18 PMID:31005808 《Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L.) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model》 作者:Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,Jinsong Wu,Jianquan Kan 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID: 《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影響因子:3.547 PMID:28189720 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448 |