產品(pin)名(ming)稱:氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒產品英文名: Oxidized Glutathione(GSSG)Assay Kit產品(pin)貨號:BC1180 產地:北京市通州區(qu)馬駒橋聯東U谷8三(san)樓產(chan)品規格(ge):50管/48樣(yang) 產(chan)品商標:solarbio 保存(cun)與運輸:4℃保存(cun)或-20℃保存(cun); 參考價格:320 庫存(cun)狀態:現貨(huo) 關鍵(jian)字:氧化型谷胱甘肽試劑盒|活性檢測試劑(ji)盒|GSSG含(han)量檢測|試劑(ji)盒
簡要介紹: 氧化(hua)(hua)型谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(GSSG)是(shi)谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)(GSH)的氧化(hua)(hua)形式(shi),又稱(cheng)為二硫代(dai)谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai),是(shi)兩分子的谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)氧化(hua)(hua)而(er)成(cheng)。GSSG會被谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)酶還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)成(cheng)GSH,因(yin)此(ci)機體中(zhong)大(da)多數是(shi)以還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)型形式(shi)存在。測定細胞(bao)內(nei)GSH和GSSG含(han)量(liang)以及GSH/GSSG比(bi)值,能(neng)夠很好地反映細胞(bao)所處的氧化(hua)(hua)還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)狀(zhuang)態(tai)。本(ben)試劑盒利(li)(li)用(yong)(yong)谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)能(neng)和5,5’-二硫代(dai)-雙-(2-硝(xiao)基(ji)ben甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan))(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應產生2-硝(xiao)基(ji)-5-巰基(ji)ben甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan),2-硝(xiao)基(ji)-5-巰基(ji)ben甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)在波長412nm處具有大(da)光吸收(shou)的特點(dian),通過2-乙烯吡dian抑制(zhi)樣品中(zhong)原(yuan)(yuan)(yuan)有的還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)型谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai),然后利(li)(li)用(yong)(yong)谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)酶將GSSG還(huan)(huan)(huan)原(yuan)(yuan)(yuan)為GSH,借(jie)此(ci)測定氧化(hua)(hua)型谷(gu)胱甘(gan)(gan)(gan)(gan)(gan)肽(tai)(tai)的含(han)量(liang)。
產品詳細描(miao)述 產品內容: 試劑一:液體1瓶,50ml,4℃保存。 試劑二:液體1支,170μl,4℃保(bao)存(cun)。 試劑三:液體1瓶 60ml,4℃保存(cun)。 試劑(ji)四:液體1瓶 8ml,4℃保存。 試劑五(wu):粉劑1支,4℃保(bao)存,用前8ml蒸餾水(shui)溶解。溶解后-20℃分裝保存。 試劑六:液(ye)體1支,40μl,用前0.8ml蒸餾(liu)水稀釋。 標準(zhun)品:粉劑1支,10mg,4℃避光保(bao)存。 產品說明: 氧化型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽(GSSG)是(shi)谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽(GSH)的(de)(de)(de)(de)氧化形(xing)式(shi),又(you)稱為二(er)硫代(dai)谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽,是(shi)兩(liang)分(fen)子的(de)(de)(de)(de)谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽氧化而成。GSSG會被谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽還(huan)(huan)(huan)原(yuan)酶還(huan)(huan)(huan)原(yuan)成GSH,因此(ci)機體中(zhong)大多(duo)數是(shi)以(yi)還(huan)(huan)(huan)原(yuan)型形(xing)式(shi)存在。測定細胞(bao)內GSH和GSSG含量以(yi)及GSH/GSSG比值,能夠很(hen)好地反映細胞(bao)所處的(de)(de)(de)(de)氧化還(huan)(huan)(huan)原(yuan)狀態。本(ben)試劑(ji)盒(he)利用谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽能和5,5’-二(er)硫代(dai)-雙(shuang)-(2-硝基(ji)(ji)ben甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應產生2-硝基(ji)(ji)-5-巰(qiu)基(ji)(ji)ben甲酸,2-硝基(ji)(ji)-5-巰(qiu)基(ji)(ji)ben甲酸在波長412nm處具(ju)有大光吸收的(de)(de)(de)(de)特點(dian),通過2-乙烯吡dian抑制樣品中(zhong)原(yuan)有的(de)(de)(de)(de)還(huan)(huan)(huan)原(yuan)型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽,然后利用谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽還(huan)(huan)(huan)原(yuan)酶將GSSG還(huan)(huan)(huan)原(yuan)為GSH,借(jie)此(ci)測定氧化型谷(gu)(gu)胱(guang)甘(gan)(gan)(gan)肽的(de)(de)(de)(de)含量。 自(zi)備儀器和用品: 分析天(tian)平(ping)、微量勻漿器(qi)(規(gui)格2ml)、低溫(wen)離心機、水(shui)浴鍋、移液器(qi)、可見分光(guang)光(guang)度(du)計、1ml比(bi)色(se)皿。 操作步驟: (1)組織處理(li) 新鮮組織先(xian)用PBS沖洗2次,然后稱取動物(wu)組織或(huo)者植物(wu)組織0.1g。加入用試(shi)劑一潤洗過的勻漿器中(勻漿器提前放冰上預冷);然(ran)后(hou)加入1ml試劑一(組(zu)織/試劑(ji)一比例保持(chi)不變即可),迅速冰上充分研磨(使用液(ye)氮(dan)研磨效果更好);10000rpm 4℃離心(xin)10min;取(qu)上(shang)清液(ye)放(fang)置于4℃待測,若暫時不能完(wan)成(cheng)測試(shi)可(ke)放于-80℃保存(可保存10天)。 (2)血液處理 血漿:將收集的抗凝血于4℃,600g離心(xin)10分鐘,吸取上層血(xue)漿到另一支試管中(zhong),加入等(deng)體積(ji)的試劑一,4℃,8000g離(li)心(xin)10分鐘,將上清移(yi)入新的(de)試管中(zhong)放置于4℃待測(ce),若暫時不能完成測(ce)試可(ke)放于-80℃保存(可(ke)保存10天)。 血細胞:將收集的抗凝血于4℃,600g離(li)心10分(fen)鐘,棄去(qu)上層血漿用3倍(bei)體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細胞,600g離(li)心10分(fen)鐘),加(jia)入(ru)等(deng)體積試劑一(yi),混(hun)勻(yun)后4℃放(fang)置10分鐘,8000g離(li)心10分鐘,吸取上清放(fang)于4℃待測,若暫時不能完成測試(shi)可(ke)放于-80℃保存(cun)(可保存(cun)10天)。 (3)細胞處理 收集(ji)不(bu)少(shao)于108個(ge)細胞,先用PBS清(qing)洗細胞2次(PBS重懸細胞,600g離心10分鐘),加入3倍細胞沉淀體(ti)積的試(shi)劑(ji)一重懸細胞,反(fan)復凍(dong)融2-3次(可在液氮中凍(dong)結,37℃水浴中溶(rong)解),8000g離心10分鐘,收(shou)集上(shang)清于4℃待測(ce)(ce),若暫時不能完成測(ce)(ce)試可放(fang)于-80℃保存(可(ke)保存10天)。 二、實驗操作: - 分光光度計(ji)預熱30min以(yi)上,調節波長412nm,蒸餾水調零(ling)。
- 試劑二放置(zhi)37℃(哺乳動(dong)物)或25℃(一般物種)水(shui)浴中保溫30min。
- 標準品的稀釋(shi):將標準品用1ml蒸餾(liu)水(shui)溶解(jie)(4℃保存),濃度為10mg/ml。取(qu)適(shi)當(dang)溶液配制濃度為25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml的標準品(試劑一(yi)十倍稀釋(shi)后進行稀釋(shi))。
- 取1.5ml離心管,加入(ru)100μL稀釋好的標準品(pin)或樣品(pin),加入2μL試劑二,混勻后37℃孵育(yu)30分鐘。
- 制(zhi)作標準曲線(xian)
孵育(yu)完成后(hou)標準管(guan)依次(ci)加(jia)入700μL試劑(ji)三,100 μL試劑四,100 μL試劑五,10 μL試劑六,迅速混勻(yun)后(hou),測(ce)定(ding)412nm處30 s和150 s光吸收A1和A2。吸光度(A2-A1)為(wei)橫坐標(biao)(x),濃(nong)度為縱坐標(y)做標準(zhun)曲(qu)線(xian)。 - 樣品管依次加(jia)入(ru)700μL試劑三(san),100 μL試(shi)劑四,100 μL試劑五,10 μL試劑六,迅速混勻后,測定(ding)412nm處30 s和150 s光(guang)吸(xi)收A1和A2,△A= A2- A1。
三、GSSG含(han)量計算 根據(ju)標準曲線,將樣品△A帶入公(gong)式中(x),計算(suan)出樣品(pin)濃度y(μg/ml)。 (1)按蛋白濃度計算 GSSG(μg / mg prot)=y×V 反總÷V 樣(yang)÷Cpr =y×10.12÷Cpr (2)按樣本質量計(ji)算(suan) GSSG(μg /g)= y×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)÷V 樣總×W)= y×10.12 ÷W (3)按(an)細胞數(shu)量(liang)計算 GSSG(μg /104 cell)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞(bao)數量)= y×10.12 ÷細胞數量 (4)按液體體積(ji)計算 GSSG(μg / mL)= y×V 反總÷V 樣= y×10 V 反(fan)總(zong)(zong):反(fan)應(ying)總(zong)(zong)體(ti)積,1.012mL;V 樣總:上清液總體積,1 mL;V 樣:加入反應體系(xi)中(zhong)上清液體積,100μL=0.1 mL;W:樣品質量(liang),g ;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL。 注意(yi)事項(xiang): - 樣(yang)品處理需(xu)勻漿*,若(ruo)當天不能完成(cheng)測量,可放-80℃保存。
- 若不(bu)確定樣(yang)品中GSSG含量(liang)的高低,可稀釋幾個(ge)梯度(du)后再進行測量(liang)。
- 此方法利用酶促反(fan)應速率計算底物濃(nong)度,盡(jin)量準確(que)在(zai)30秒和150秒處完成讀(du)數(shu)。
- 因為試劑一中含有蛋白質沉淀劑,因此上清液(ye)不能用于蛋白濃度測定。
相關文獻: 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作(zuo)者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量檢測試劑盒 |