產品名稱:還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量產品英(ying)文名: Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit產品貨號:BC1170 產地:北京市通州(zhou)區(qu)馬駒橋聯東U谷8三樓產品規格(ge):50管/48樣 產品(pin)商(shang)標(biao):solarbio 保存與運(yun)輸:4℃保存或-20℃保存; 參(can)考價格:240 庫存狀態:現貨(huo) 關鍵字:還(huan)原型谷胱(guang)甘肽試劑盒|活性(xing)檢測試劑盒|GSH含量檢測|試劑盒
簡要介紹: GSH 是細胞(bao)內主要的抗氧(yang)(yang)化(hua)(hua)(hua)巰(qiu)基(ji)物(wu)質(zhi),在抗氧(yang)(yang)化(hua)(hua)(hua)、蛋白質(zhi)巰(qiu)基(ji)保護和氨(an)基(ji)酸跨(kua)膜(mo)運輸(shu)等中具(ju)有重要作(zuo)用。還(huan)原型與氧(yang)(yang)化(hua)(hua)(hua)型比值(GSH/GSSG)是細胞(bao)氧(yang)(yang)化(hua)(hua)(hua)還(huan)原狀(zhuang)(zhuang)態的主要動態指標。因此,測定細胞(bao)內 GSH 和 GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值,能夠很好地反映細胞(bao)所處的氧(yang)(yang)化(hua)(hua)(hua)還(huan)原狀(zhuang)(zhuang)態。 DTNB 與 GSH 反應生成復合物(wu),在 412nm 處有(you)特征吸收(shou)峰;其吸光度與 GSH 含量成正比。
產品詳(xiang)細描(miao)述 產品內容: 試劑(ji)一:液(ye)體(ti)(ti)1瓶,50mL,4℃保存(cun)。 試劑(ji)二:液(ye)體1瓶,50 mL,4℃保(bao)存(cun)。 試(shi)劑三:液體1瓶,15 mL,4℃避光(guang)保存。 標準(zhun)品(pin):粉劑1支,10mg,4℃避光保(bao)存。 產品說明: 谷胱甘肽是由谷氨酸(Glu)、半胱氨酸(Cys)和甘氨(an)酸(suan)(Gly)組成的天然三肽,是一種含(han)巰(qiu)基(ji)(—SH)的(de)化合物,廣泛(fan)存在(zai)于動物組織、植物組織、微生物和(he)(he)酵(jiao)母(mu)中(zhong)。谷胱甘肽能和(he)(he)5,5’-二硫(liu)代-雙-(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應產生(sheng)2-硝基-5-巰(qiu)基ben甲酸(suan)和谷(gu)胱甘肽二硫化物(GSSG)。2-硝基-5-巰基ben甲酸為黃色產物,在波長412nm處具有大光吸(xi)收(shou)。 自備(bei)儀器和(he)用品: 分析天平、微(wei)量勻漿器(規格2ml)、低溫離心機(ji)、水(shui)浴鍋、移液器、可(ke)見分光光度計,1ml比色皿。 樣(yang)品的處(chu)理 1、組織處理: 新鮮組織先(xian)用PBS沖洗2次,然后稱取動物組(zu)織或者植(zhi)物組(zu)織0.1g。加入用試劑(ji)一潤洗過的(de)勻(yun)漿器(qi)中(勻(yun)漿器(qi)提(ti)前放冰上預冷);然后(hou)加入1ml試劑一(組(zu)織/試劑一(yi)比例保持不變即可),迅速冰(bing)上充分研磨(mo)(使用液氮研磨(mo)效果更好(hao));8000g 4℃離心10min;取(qu)上(shang)清液放置(zhi)于4℃待測,若(ruo)暫時不能完成測試可放于-80℃保(bao)存(可(ke)保(bao)存10天)。 2、血(xue)液處(chu)理 血漿:將收集的抗凝血于4℃,600g離心(xin)10分(fen)鐘,吸(xi)取上層血漿到另一支(zhi)試管中,加入等體積的試劑一, 4℃,8000g離(li)心10分鐘,將上(shang)清移入(ru)新的試管(guan)中放置于4℃待測,若暫時不能完(wan)成測試可放于-80℃保存(可保存10天)。 血細胞:將收集的抗(kang)凝血于4℃,600g離心10分鐘(zhong),棄(qi)去上層血漿用(yong)3倍體積的PBS清洗3次(用PBS重懸血細胞,600g離心10分鐘),加入(ru)等體積試劑一(yi),混(hun)勻后4℃放置10分鐘,8000g離(li)心10分鐘,吸(xi)取上(shang)清放于4℃待測(ce),若(ruo)暫時不能完成測(ce)試(shi)可放于-80℃保存(cun)(可保存(cun)10天)。 3、細胞處理 收集(ji)不少(shao)于106個細胞,先(xian)用PBS清洗細胞2次(PBS重(zhong)懸細胞,600g離心10分(fen)鐘),加入(ru)3倍細胞沉(chen)淀體積的(de)試劑(ji)一重懸細胞,反復凍融2-3次(可在(zai)液氮中凍結(jie),37℃水浴中(zhong)溶(rong)解(jie)),8000g離心10分鐘(zhong),收集(ji)上清于(yu)4℃待測,若暫時不能完成測試可放于-80℃保(bao)存(可保(bao)存10天(tian))。 操作步(bu)驟 - 分光光度計預熱(re)30min以上,分光(guang)(guang)光(guang)(guang)度(du)計(ji)調(diao)節(jie)波長412nm,蒸餾水調零(ling)。
- 試劑二放置37℃(哺乳動(dong)物)或25℃(一般物種)水浴(yu)中保溫30min。
- 空(kong)白(bai)管檢測:取1ml比色皿,依次(ci)加(jia)入100μL蒸餾(liu)水,700μL試劑(ji)二,200μL試劑三,混勻,放(fang)置2min后(hou)測(ce)定412nm吸光度(du)A1。
- 制作標準(zhun)曲線
稱1mg標(biao)準(zhun)品(pin)用(yong)1ml蒸餾水溶解,濃度為1mg/ml。取(qu)適當溶液(ye)配制濃度為200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml的標準(zhun)品(試(shi)劑一十(shi)倍稀釋后(hou)進(jin)行稀釋)。 取1.5mlEP管(guan)依次加(jia)入100μL標(biao)準(zhun)品(pin),700μL試劑二(er),200μL試劑三,每管混勻(yun)后靜置(zhi)2min,檢測412nm處吸光度,吸光度減去(qu)空白(bai)孔(A1)為橫坐(zuo)標,根據吸光度(du)(x)和濃度(du)(y,μg/ml)做(zuo)出標準曲線。 - 樣品管測定:取(qu)1ml比色皿,依次加(jia)入100μL樣品(pin),700μL試劑二,200μL試劑三,混勻后靜置2min檢測412nm處(chu)吸光度A2,△A= A2- A1。
GSH含量計算(suan) 根據標(biao)準曲(qu)線,將樣品(pin)△A帶入公式中(x),計算出樣品濃度(du)y(μg/ml)。 (1)按蛋白濃度計(ji)算 GSH(μg / mg prot)=y×V 反總÷V 樣÷Cpr =y×10÷Cpr (2)按樣本質量計算 GSH(μg /g)= y×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= y×10 ÷W (3)按細胞數量計算 GSH(μg /104 cell)= y×V 反總÷(V 樣(yang)÷V 樣總×細胞數(shu)量(liang))= y×10 ÷細胞(bao)數量 (4)按液體體積計算 GSH(μg / mL)= y×V 反總÷V 樣= y×10 V 反總(zong):反應總(zong)體積,1mL;V 樣總(zong):上清(qing)液總(zong)體積,1 mL;V 樣:加入(ru)反應體(ti)系中上清(qing)液體(ti)積,100μL=0.1 mL;W:樣(yang)品質量,g ;Cpr:上清液(ye)蛋白質濃度,mg/mL。 注意事項(xiang): - 樣品處理需(xu)勻漿(jiang)*,若當天不能完成(cheng)測量(liang),可放(fang)-80℃保(bao)存(cun)。
- 標準品:還原型谷胱甘肽現配現用(yong)。
- 若(ruo)不(bu)確定樣品中GSH含(han)量的高低,可稀釋幾個梯度后(hou)再(zai)進行測量。
- 因為(wei)試劑一(yi)中含(han)有蛋(dan)白質沉淀(dian)劑,因此(ci)上清液不能用于(yu)蛋(dan)白濃(nong)度測定。
相關文獻: 《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li, Lei Zhang , Feng Wang, Ran‐ran Qin ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影響因子:10.754 PMID:29152896 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30365070 《Inhibition of MUC1‐C regulates metabolism by AKT pathway in esophageal squamous cell carcinoma》 作者:Xin GongSun YongQiang Zhao Bin Jiang ZhongWei Xin Mo Shi Liang Song QiMing Qin Qiang Wang XiangYan Liu 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30523643 《Light-Responsive Metal–Organic Framework as an Oxidase Mimic for Cellular Glutathione Detection》 作者:Yufeng Liu,Min Zhou,Wen Cao,Xiaoyu Wang,Quan Wang,Sirong Li and Hui Wei 期刊:Anal Chem. 影響因子:6.35 PMID:31148448 還原型谷胱甘肽(GSH)含量檢測試劑盒 常量 |