產品(pin)名稱(cheng)::谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒 微(wei)量法產品英文(wen)名: Micro Glutathion Reductases(GR) Assay Kit產品貨號(hao):BC1165 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓產品規(gui)格:100管/96樣 產品(pin)商標(biao):solarbio 保存(cun)與運輸:4℃保存(cun)或(huo)-20℃保存(cun); 參(can)考價格:900 庫存狀(zhuang)態:現貨(huo) 關鍵字(zi):谷胱甘肽還原酶試劑盒|活性(xing)檢測(ce)試劑盒|GR活性檢(jian)測|試劑盒|微量法
簡要介紹(shao): GR 是廣泛(fan)存在于真核和(he)原(yuan)核生物(wu)中(zhong)(zhong)的(de)一(yi)種黃素蛋白(bai)氧(yang)(yang)化還原(yuan)酶,是谷胱甘(gan)肽氧(yang)(yang)化還原(yuan)循(xun)環(huan)(huan)的(de)關鍵酶之一(yi)(通(tong)常昆蟲中(zhong)(zhong) GR 被 TrxR 取代)。GR 催(cui)化NADPH 還原(yuan) GSSG 生成 GSH,有助于維持體內GSH/GSSG比值。GR 在氧(yang)(yang)化脅迫反應中(zhong)(zhong)對活性氧(yang)(yang)清除起關鍵作用,此外 GR還參與抗(kang)壞血酸-谷胱甘(gan)肽循(xun)環(huan)(huan)途徑(jing)。 GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH,同時不斷消耗NADPH生成(cheng)NADP+;NADPH在(zai)340nm有(you)特(te)征吸收峰,相反NADP+在(zai)該波長無吸收峰;通過測定340nm吸光度下(xia)降速率;來測定NADPH脫(tuo)氫速率,從而計(ji)算GR活性。
產品詳(xiang)細描述 產品(pin)內(nei)容: 試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。 試劑二(er):液體1mL×1支,4℃保存。 試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2.0mL蒸(zheng)餾水,混(hun)勻(yun)。 產品說明: GR是廣泛(fan)存(cun)在于(yu)真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,GR催(cui)化GSSG還原生成GSH,是谷胱甘肽氧化還原循環(huan)的關鍵酶之一(通常昆蟲中GR被TrxR取代)。GR催化NADPH還(huan)原GSSG生(sheng)成GSH,有助于維持體內GSH/GSSG比(bi)值。GR在氧(yang)(yang)化脅迫反應中對活性氧(yang)(yang)清除起關鍵作用,此外GR還參與(yu)抗(kang)壞血(xue)酸-谷胱甘肽循環(huan)途徑。 GR能催化NADPH還(huan)原(yuan)GSSG再生GSH,同時NADPH脫氫生(sheng)成(cheng)NADP+;NADPH在340 nm有(you)特征吸收峰,相反NADP+在該(gai)波長無吸(xi)收峰(feng);通過測(ce)定340 nm吸光度下降速率(lv)來測定NADPH脫氫速率,從而計算(suan)GR活性。 自(zi)備儀器和(he)用(yong)品: 低溫離心機、水浴(yu)鍋、移液器、紫外(wai)分光光度計/酶(mei)標(biao)儀、微量石英(ying)比色皿(min)/96孔板(UV板)和蒸餾水(shui) 操作步驟: 一(yi)、粗酶液(ye)提取: 稱約0.1g組織,加(jia)入1.0 ml試劑一,冰(bing)上充分研磨,10000rpm 4℃離心10min,取上(shang)清液,待測。 二、GR測定操作: 1. 分光光度(du)計或酶標(biao)儀預熱30 min以上,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。 2. 試(shi)劑一置于25℃(普通物質)或者37℃(哺乳動物(wu))中預熱30min以上。 3. 空白管(guan):取微(wei)量(liang)石英(ying)比色皿或(huo)96孔板,加入10μL試劑二(er),20μL試(shi)劑三,170μL試劑(ji)一,于340nm測(ce)定10s和(he)190s吸光(guang)度,記為A空1和(he)A空2。 4. 測定管:取微(wei)量石英比色皿(min)或96孔板(ban),加(jia)入10μL試(shi)劑二,20μL試劑三,20μL上清(qing)液,150μL試劑一(yi),于340nm測定10s和190s吸光度,記(ji)為A測1和A測2。 注:樣品測定10s時吸光度(du)后,將比色(se)皿(min)放入25℃(普(pu)通物質)或者37℃(哺(bu)乳動物)水浴,3min后拿(na)出,吸打混勻,立(li)即(ji)測定190s時(shi)的吸光度。 三(san)、GR活性計(ji)算: a.使(shi)用(yong)微量石英比色(se)皿測(ce)定的計算公式如下 (1)按蛋白(bai)濃度計(ji)算 活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0條件下,每(mei)毫(hao)克蛋白每(mei)分鐘(zhong)催化1μmol NADPH氧化為一個酶(mei)活力單位。 GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定管-△A空白(bai)管(guan))÷(ε×d)×V反總×106] ÷(Cpr×V樣)÷T = 0.536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr (2)按樣本鮮(xian)重計算(suan) 活性單(dan)位(wei)定義:在一(yi)定溫度中,pH8.0條(tiao)件下(xia),每(mei)克(ke)樣品每(mei)分鐘催化(hua)1μmol NADPH氧化為一個酶(mei)活力單位。 GR酶(mei)活(U/g 鮮重)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反(fan)總×106] ÷(V樣(yang)÷V樣總×W)÷T = 0.536×(△A測定管-△A空(kong)白(bai)管(guan))÷W △A空白管=A空1-A空(kong)2,△A測定(ding)管=A測(ce)1-A測2;ε:NADPH摩(mo)爾消光系(xi)數6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反(fan)總:反(fan)應體系總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上(shang)清(qing)液蛋白(bai)濃度(mg/mL);W :樣(yang)品質(zhi)量;V樣:加入反應體系(xi)中上(shang)清液體積,20μL =2×10-2 mL;V樣(yang)總:提取液體積,1 mL;V樣總:提取液體(ti)積, 1 mL;T:反(fan)應時間,3 min。 b.使用96孔板測定的計算公式如下 (1)按蛋白濃(nong)度(du)計(ji)算 活性單位定(ding)(ding)義:在一定(ding)(ding)溫度中,pH8.0條(tiao)件下,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADPH氧化(hua)。 GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定-△A空白)÷(ε×d)×V反總×106]÷(Cpr×V樣)÷T =0.893×(△A測定管-△A空白(bai)管)÷Cpr (2)按樣本鮮重計(ji)算(suan) 活性單位(wei)定義:在一定溫度(du)中,pH8.0條件下,每克樣品每分鐘(zhong)催(cui)化1μmol NADPH氧(yang)化(hua)。 GR酶活(U/g鮮重)= [(△A測定(ding)管-△A空白管(guan))÷(ε×d)×V反(fan)總×106]÷(V樣÷V樣總×W÷T =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷W △A空白(bai)管=A空1-A空2,△A測定管=A測1-A測2;ε:NADPH摩爾消光(guang)系數6.22×103L/mol/cm;d:96孔(kong)板(ban)光(guang)徑,0.6 cm;V反(fan)總:反(fan)應(ying)體系(xi)總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液(ye)蛋(dan)白濃度(mg/mL);W :樣品質量;V樣:加入反應(ying)體(ti)系中上清液體(ti)積,20μL =2×10-2 mL;V樣(yang)總:提取液體積,1 mL;V樣總(zong):提取液體積,1 mL;T:反應時間,3 min。 注(zhu)意事(shi)項(xiang): (1)樣品處理等過程均需(xu)要在(zai)冰上進行,且須在(zai)當(dang)日測(ce)定酶活力,勻(yun)漿液(ye)避免(mian)反(fan)復(fu)凍融; (2)試劑(ji)三須現配現用,配置完后(hou),置于冰上; (3)測定前須(xu)先用1~2個樣做預實驗(yan),確保(bao)180s內吸光值變化呈線性,哺乳動物(wu)組織一般(ban)須用試劑一稀釋2~5倍; (4)細胞中GR活性(xing)測定時,細(xi)胞(bao)數(shu)目須(xu)在(zai)300萬-500萬之間,細胞中GR的(de)提取時可加試劑一后研磨或超聲波(bo)處理,不能用細胞裂解液處理細胞。
相關文獻: 《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226 《A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice》 作者:Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,Qibin Ma,Huaiyu Bu,Kang Chong,Yunyuan Xu 期刊:Journal of Plant Physiology 影響因子:2.825 PMID:30055519 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448 谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒 |