產品名稱:NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒產品英文(wen)名(ming): NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit產品貨(huo)號:BC1120 產地(di):北京市通州(zhou)區馬駒橋聯東(dong)U谷8三(san)樓產品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio 保(bao)存(cun)與運(yun)輸:4℃保(bao)存(cun)或-20℃保(bao)存(cun); 參考價格(ge):420 庫(ku)存狀態:現貨(huo) 關鍵字:NADP蘋果酸酶試(shi)劑(ji)盒|活性(xing)檢測(ce)試劑盒|NADP-ME活(huo)性檢測(ce)|試劑(ji)盒
簡要介(jie)紹: ME 廣泛存在于微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)、培養(yang)細胞、動物(wu)(wu)(wu)和(he)(he)(he)植物(wu)(wu)(wu)胞漿中,尤其在植物(wu)(wu)(wu)組(zu)織中活(huo)性較(jiao)高。ME 催 化蘋果酸(suan)氧化脫羧的(de)(de)(de)可(ke)逆反應,產生(sheng)(sheng)丙tong酸(suan)和(he)(he)(he) CO2,以及伴隨(sui) NAD(P)+的(de)(de)(de)還(huan)原反應,是蘋果酸(suan)代謝(xie) 的(de)(de)(de)關鍵酶。ME 活(huo)性與(yu)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)合成和(he)(he)(he)抗氧化密(mi)切相關。近年來植物(wu)(wu)(wu) ME 活(huo)性測定(ding)較(jiao)多,已經成為抗氧 化研究的(de)(de)(de)熱點。根(gen)據輔酶專一(yi)性和(he)(he)(he)對(dui)底(di)物(wu)(wu)(wu)特異性的(de)(de)(de)不同,可(ke)將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和(he)(he)(he) NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還(huan)原成 NADPH,在 340nm 下測定(ding) NADPH 增加(jia)速率。
產品詳細描(miao)述(shu) 產品內容: 提(ti)取液:液體 70mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體(ti) 40mL×1 瓶(ping),4℃保存; 試劑(ji)二:粉劑(ji)×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 20mL 提取液充分溶解備用; 試劑(ji)三:粉劑(ji)×2 支,4℃保存;用(yong)時每支加 1mL 雙蒸水充分(fen)溶解備用(yong); 試劑四:粉劑×2 支(zhi)(zhi),-20℃保存;用(yong)時每支(zhi)(zhi)加 500μL 雙蒸水充分溶解備用(yong)。 工作(zuo)液:在 15mL 試劑(ji)(ji)二中加入 2mL 試劑(ji)(ji)三和 1mL 試劑(ji)(ji)四(si),可以根據(ju)比例現(xian)用現(xian)配(pei)。 產品說明: ME 廣泛存在于微生物(wu)(wu)、培養(yang)細胞(bao)、動(dong)物(wu)(wu)和(he)(he)植(zhi)物(wu)(wu)胞(bao)漿(jiang)中,尤其在植(zhi)物(wu)(wu)組織中活性(xing)(xing)較(jiao)高。ME 催 化(hua)蘋果酸氧化(hua)脫(tuo)羧(suo)的可逆(ni)反應,產生丙tong酸和(he)(he) CO2,以及(ji)伴(ban)隨 NAD(P)+的還原反應,是蘋果酸代謝(xie) 的關(guan)鍵酶(mei)。ME 活性(xing)(xing)與生物(wu)(wu)合成(cheng)和(he)(he)抗(kang)氧化(hua)密(mi)切相關(guan)。近年來植(zhi)物(wu)(wu) ME 活性(xing)(xing)測定較(jiao)多,已經成(cheng)為(wei)抗(kang)氧 化(hua)研究的熱點。根據(ju)輔酶(mei)專一性(xing)(xing)和(he)(he)對(dui)底物(wu)(wu)特(te)異性(xing)(xing)的不同,可將 ME 分(fen)為(wei) NAD-ME(EC1.1.1.38)和(he)(he) NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化(hua) NADP+還原成(cheng) NADPH,在 340nm 下(xia)測定 NADPH 增加速率。 試(shi)驗中所需的儀(yi)器和試(shi)劑: 紫外分光光度計(ji)、低溫(wen)離心(xin)機、水浴(yu)鍋、可(ke)調節移液器、1mL 石英比色皿、勻(yun)漿器和蒸餾水
操作(zuo)步驟: 細(xi)菌(jun)(jun)、細(xi)胞(bao)(bao)(bao)或組織樣品的(de)制備: 細(xi)菌(jun)(jun)或培養細(xi)胞(bao)(bao)(bao):先收集細(xi)菌(jun)(jun)或細(xi)胞(bao)(bao)(bao)到離心管內,棄上清,按(an)照每 500 萬細(xi)菌(jun)(jun)或細(xi)胞(bao)(bao)(bao)加入(ru) 1mL 提取 液,超聲(sheng)波破碎細(xi)菌(jun)(jun)或細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(功(gong)率 20%,超聲(sheng) 3s,間隔 10s,重復(fu) 30 次)。8000g 4℃離心 10min, 取上清,置(zhi)冰上待測。 組織(zhi):稱取(qu)(qu)約 0.1g 組織(zhi),加入 1mL 提取(qu)(qu)液進行冰浴勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心 10min,取(qu)(qu)上清,置 冰上待測(ce)。 血清(漿)樣品:直接檢測(ce)。 - 測定步(bu)驟:
- 紫外分光(guang)光(guang)度計預熱 30min 以(yi)上,調(diao)節波長(chang) 340nm,蒸餾水調(diao)零。
- 將試劑一在 37℃(哺乳(ru)動物)或 25℃(其它物種)中保溫 15min 左右。
- 操作(zuo)表:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 試劑一 | 600 | 工(gong)作液 | 270 | 樣本 | 30 |
將(jiang)上(shang)述試劑按順序加入 1 mL 石英比色(se)皿中,混勻后(hou)在 37℃(哺乳動物(wu))或 25℃(其它物(wu)種), 340 nm 波長下(xia)記錄(lu)初(chu)始吸光度 A1 和反應(ying) 1min 后(hou)的吸光度 A2,計算ΔA=A2-A1。
注意事項: - 若(ruo) A2-A1 大于 0.5,需將(jiang)酶液用(yong)提(ti)取液稀釋,使 A2-A1 小(xiao)于 0.5,可提(ti)高檢測靈敏度。
- 實驗(yan)時(shi),試劑(ji)(ji)三、試劑(ji)(ji)四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。試劑(ji)(ji)一(yi) 37℃或 25℃水浴(yu)放置。
- 比色皿(min)中(zhong)反(fan)應液的溫度(du)必須(xu)保持 37℃或 25℃,取小燒(shao)杯(bei)一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水(shui), 將(jiang)此(ci)燒(shao)杯(bei)放入 37℃或 25℃水(shui)浴鍋中(zhong)。在反(fan)應過程中(zhong)把比色皿(min)連同反(fan)應液放在此(ci)燒(shao)杯(bei)中(zhong)。
- 兩個(ge)人(ren)(ren)同時(shi)做此實驗,一個(ge)人(ren)(ren)比色,一個(ge)人(ren)(ren)計時(shi),以保證實驗結果(guo)的準確(que)性。
- 如果ΔA<0.01,可將反應時間(jian)延長到(dao) 5 分(fen)鐘或 10 分(fen)鐘。
- NADP-ME 活性計算:
- 組織中(zhong) NADP-ME 活力的計(ji)算(suan):
- 按樣(yang)本(ben)蛋白濃度計(ji)算(suan):
單位的定義:每(mei) mg 組織蛋白在反應體系(xi)中每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶(mei)活(huo)力單位。 NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr - 按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計算:
單(dan)位的定義(yi):每(mei) g 組織在(zai)反應體系中每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定義(yi)為一個酶(mei)活力單(dan)位。 NADP-ME(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W) ÷T =4823×ΔA÷W - 細菌或細胞中 NADP-ME 活力的計算:
- 按樣本蛋白濃度計算:
單位(wei)的定義:每(mei) mg 組(zu)織(zhi)蛋白在反應體系中(zhong)每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。 NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr - 按細菌或細胞密(mi)度計算:
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中(zhong)每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一(yi)個酶活力(li) 單位。 NADP-ME(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)×500) ÷T=9.65×ΔA。 - 血清中 NADP-ME 活力(li)的計(ji)算:
單(dan)位的定(ding)義:每(mei) mL 血清在(zai)反應(ying)體(ti)系中每(mei)分鐘生成 1 nmol NADPH 定(ding)義為一個酶活力單(dan)位。 NADP-ME(U/mL)=[ΔA×V 反(fan)(fan)總(zong)÷(ε×d)×10 9]÷V 樣(yang)÷T =4823×ΔA。 V 反(fan)(fan)總(zong):反(fan)(fan)應體系總(zong)體積,9×10 -4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shu),6.22×10 3L/mol/cm;d:比(bi)色 皿(min)光徑,1cm;V 樣(yang):加(jia)入樣(yang)本體積,0.03 mL;V 樣(yang)總(zong):加(jia)入提取液體積,1 mL;T:反(fan)(fan)應時間, 1min;Cpr:樣(yang)本蛋白質(zhi)濃度,mg/mL;W:樣(yang)品質(zhi)量,g;500:細菌或(huo)細胞總(zong)數(shu),500 萬。
相關文獻: 《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期(qi)刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809 NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒 |