輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒 可見分光光度法 注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定 BC1100 50T/24S 酸性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存; 堿性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:基質緩沖液 15mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 4mL 雙蒸水,混勻; 試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 4mL 雙蒸水,混勻; 試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時加入 4mL 雙蒸水,混勻; 試劑五:液體 1.8mL×1 支,4 ℃保存; 試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存; 試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。 一、NADP 和 NADPH 的提取: 1、血清(漿)中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提(ti)(ti)取:取 0.1mL 血清(漿(jiang)),加入(ru) 0.9 mL 酸性提(ti)(ti)取液(ye),煮沸 5min(蓋緊);冰(bing)浴(yu)冷卻(que)后(hou),10000g 4℃離心 10min;取上(shang)(shang)(shang)清加入(ru)等體積(ji)堿性提(ti)(ti)取液(ye)使之(zhi)中和(he);混勻,10000g 4℃離心 10min,取上(shang)(shang)(shang)清,冰(bing)上(shang)(shang)(shang)保存待測。 NADH 的提(ti)取(qu)(qu):取(qu)(qu) 0.1mL 血清(漿),加入(ru) 0.9 mL 堿性提(ti)取(qu)(qu)液,煮沸 5min,冰(bing)浴中冷卻后,10000g 4℃離心10min,取(qu)(qu)上(shang)清加入(ru)等(deng)體積(ji)酸性提(ti)取(qu)(qu)液使之中和(he);混(hun)勻,10000g 4℃離心 10min,取(qu)(qu)上(shang)清,冰(bing)上(shang)保存待測。 2、組織中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.9 mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊),冰浴冷卻后,10000g4℃離心 10min,取上清加入等體積堿性提取液混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。 NADPH 的提(ti)取(qu):稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織,加入 0.9 mL 堿性(xing)提(ti)取(qu)液,冰浴研(yan)磨,煮沸 5min(蓋緊),冰浴冷卻(que)后,10000g4℃離心(xin) 10min,取(qu)上(shang)清加入等體積酸性(xing)提(ti)取(qu)液混勻,10000g 4℃離心(xin) 10min,取(qu)上(shang)清,冰上(shang)保(bao)存待測。 3、細胞或細菌中 NADP 和 NADPH 的提取: NADP 的(de)提(ti)取:收(shou)集 400-500 萬細(xi)胞或(huo)細(xi)菌,加入 0.9 mL 酸性提(ti)取液(ye),超聲(sheng)波破碎 1min(強度 20%或(huo) 200W,超聲(sheng) 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散(san)失),冰(bing)浴(yu)中(zhong)冷卻后,10000g 4 ℃離心(xin) 10min,取上清液(ye)另一(yi)新的(de)離心(xin)管中(zhong),加入等體積的(de)堿(jian)性提(ti)取液(ye)使之中(zhong)和,混勻,冰(bing)上保存待(dai)測。 NADH 的提取:收集 400-500 萬細胞或(huo)細菌,加(jia)入(ru)(ru) 0.9 mL 堿性提取液,超聲波破碎 1min(強(qiang)度 20%或(huo) 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸(fei) 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰(bing)浴(yu)中冷卻后(hou),10000g 4 ℃離心 10min,取上清(qing)液另(ling)一新(xin)的離心管中,加(jia)入(ru)(ru)等體積的酸性提取液使之中和,混勻,冰(bing)上保(bao)存待測 輔酶ⅡNADP(H)含量檢測試劑盒 |