Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒 產品(pin)英文名(ming):Ca++Mg++ ——ATPase Assay Kit產(chan)品貨號(hao):BC0960 產地:北京市通州區馬駒(ju)橋(qiao)聯東U谷(gu)8三樓(lou)產(chan)品(pin)規格:50管/24樣(yang) 產(chan)品商標:solarbio 保存(cun)與運輸:4℃保存(cun)或-20℃保存(cun); 參考價格:260 庫存狀態:現貨(huo) 關(guan)鍵字:ATP酶(mei)活性檢測試(shi)劑(ji)盒|ATP檢(jian)測試劑盒|
簡要(yao)介(jie)紹(shao): Ca++ Mg++-ATP 酶廣泛(fan)分(fen)布于植物(wu)(wu)、動物(wu)(wu)、微生物(wu)(wu)和細(xi)胞中(zhong),可催(cui)化(hua)ATP 水解生成ADP 和無(wu)機磷。 根據Ca++ Mg++-ATP 酶(mei)分解ATP 生成ADP 及(ji)無(wu)機磷,通過測定(ding)無(wu)機磷的量來(lai)確定(ding)ATP 酶(mei)活性高(gao)低(di)。
產品詳細描述 產品(pin)內容(rong): 試劑一(yi):液體30mL×1 瓶(ping),4℃保存。 試(shi)劑二(er):液體4mL×1 瓶,4℃保存(cun)。 試劑三:粉劑×2支(zhi),-20℃保存(cun);臨用前加(jia)入(ru)1mL蒸餾(liu)水充(chong)分混勻(yun)待(dai)用,現(xian)用現(xian)配。用不完的試劑-20℃可保存一周。 試(shi)劑四:液體2mL×1 瓶,4℃保存。 試劑五:粉(fen)劑×1瓶,4℃保存。用時加入3mL雙蒸水, 4℃保存。 試劑(ji)六:粉劑(ji)×1瓶, 4℃保存。用時加(jia)入(ru)15mL雙(shuang)蒸水,溶解(jie)后4℃保存一周。 試劑(ji)七:粉劑(ji)×1瓶, 4℃保存(cun)。用(yong)時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。 試劑八(ba):液體(ti)15mL×1 瓶(ping),室溫保存。 標(biao)準品:10mmol/L 標準磷貯(zhu)備液1mL×1 支,4℃保存。 0.5μmol/mL 標準磷應用液配(pei)制:將(jiang)標準(zhun)品 20倍(bei)稀釋,即取0.1mL標準品加1.9mL蒸(zheng)餾(liu)水充分混(hun)勻。 定磷劑的配(pei)制:按H2O: 試劑六:試劑七:試(shi)劑八(ba)=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷劑(ji)應(ying)為(wei)淺黃色。若無色則(ze)試劑(ji)失(shi)效(xiao),若是(shi)藍色則(ze)為(wei)磷污染(ran),定磷劑(ji)現用現配。 注(zhu)意:配試(shi)劑用(yong)新的燒(shao)杯、玻棒和(he)玻璃移液器,也可以用(yong)一次性塑料器皿,避(bi)免(mian)磷污染(ran)。 產(chan)品說(shuo)明: Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物(wu)、動物(wu)、微(wei)生物(wu)和細胞中(zhong),可催化ATP水解生成ADP和無機磷。 根(gen)據Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及(ji)無機磷,通過測(ce)定無機磷的量來確(que)定ATP酶(mei)活(huo)性高低(di)。 需自(zi)備的(de)儀(yi)器(qi)及用品: 可見(jian)分光光度計、水浴鍋、臺式離(li)心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研(yan)缽、冰和蒸餾水。 操作步驟(zou): 一、樣品酶(mei)液的制備: 1、細菌、細胞(bao)或組(zu)織樣品的制(zhi)備: 細(xi)(xi)(xi)菌或培養細(xi)(xi)(xi)胞(bao):先收集細(xi)(xi)(xi)菌或細(xi)(xi)(xi)胞(bao)到離(li)心(xin)管內,離(li)心(xin)后棄(qi)上清;按照(zhao)每500萬(wan)細菌或細胞加入1mL試劑(ji)一,超聲(sheng)波破碎(sui)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。 組織:稱取約0.1g組(zu)織,加入1mL試(shi)劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰(bing)上待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢測。 二(er)、測定步驟: 1、分光光度計預熱30min以上(shang),調節波長660nm,蒸餾水調(diao)零。 2、酶促反應(在(zai)EP管中加入(ru)下(xia)列試劑) | 對(dui)照管(guan) | 測定管 | 試劑(ji)一(μL) | 130 | 90 | 試劑二(μL) | 80 | 80 | 試劑三(μL) | 40 | 40 | 試(shi)劑四(si)(μL) | | 40 | 樣品(μL) | | 200 | 混(hun)勻(yun),37℃(哺乳(ru)動物)或25℃(其他物種)準確水浴10min | 試劑五(μL) | 50 | 50 | 樣品(μL) | 200 | | 混勻(yun),4000g,常溫離心10min,取上清液 |
3定磷(1.5mLEP管中依次加入下列試劑) | 空白管 | 標(biao)準管 | 對照管 | 測定管 | 0.5μmol/ml標準磷應用液(μL) | | 100 | | | 上清液(μL) | | | 100 | 100 | 蒸餾水(μL) | 100 | | | | 定磷(lin)試劑(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,40℃水浴10 min,冷卻室溫,在 660nm處比色(se)。 三、計算 1、血清(漿)Ca++ Mg++- ATPase活力的計算(suan): 定義:規定每小時每毫升血清(漿)中Ca++ Mg++- ATP 酶分解(jie)ATP 產生1μmol無機磷(lin)的量為(wei)一(yi)個酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/mL)= C標準管(guan)×(A測定管(guan)-A對照管)÷(A標準管-A空(kong)白(bai)管)×V總÷V樣÷T=7.5×(A測定(ding)管-A對照管)÷(A標準管-A空白管) 2、組織、細菌或細胞中(zhong)Ca++ Mg++- ATPase活(huo)力的計算: (1)按蛋白濃度計算: 定義:規定每小時(shi)每毫克組織蛋白中Ca++ Mg++- ATP 酶分解(jie)ATP 產生1μmol無(wu)機磷的量為一個(ge)酶活力單位。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/ mg)= C標(biao)準管(guan)×(A測(ce)定管(guan)-A對照管)÷(A標準(zhun)管-A空(kong)白管(guan))×V總÷(Cpr×V樣(yang))÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空(kong)白管)÷Cpr (2)按樣本鮮重(zhong)計算: 定(ding)義:規定(ding)每小時每克組織中Ca++ Mg++-ATP 酶分(fen)解ATP 產生(sheng)1μmol無機磷的量為一個酶活力(li)單位(wei)。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/g)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白(bai)管)×V總(zong)÷(V樣(yang)÷V樣總×W)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標(biao)準(zhun)管(guan)-A空白管(guan))÷W (3)按(an)細菌(jun)或(huo)細胞密(mi)度(du)計算(suan): 定義:規定每小(xiao)時每1萬(wan)個細(xi)菌或(huo)細(xi)胞中Ca++ Mg++-ATP 酶(mei)分解(jie)ATP 產(chan)生(sheng)1μmol無機磷的(de)量為一(yi)個酶活(huo)力單位(wei)。 Ca++ Mg++-ATP酶活力(U/104)= C標準管×(A測(ce)定管-A對照管(guan))÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣(yang)總×500)÷T=0.015×(A測(ce)定管-A對照管)÷(A標準管-A空(kong)白管) C標準管:標準管濃度(du),0.5μmol/mL;V總(zong)(zong):酶促反應(ying)總(zong)(zong)體(ti)積,0.5mL;V樣(yang):加入樣(yang)本體積,0.2mL ;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反(fan)應時間,1/6小時;Cpr:樣本蛋(dan)白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌(jun)或細胞總數,500萬。 注(zhu)意事項: 1、由于每一個(ge)樣(yang)都(dou)必須做(zuo)對照,本(ben)試劑盒50管(guan)只能測 24份(fen)Ca++ Mg++-ATP酶。 2、此(ci)法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測(ce)定所用試管要求嚴格(ge)無磷。避免磷污染(ran)是檢測(ce)成(cheng)敗的關鍵。 3、空白管(guan)和(he)標準管(guan)只要(yao)做一(yi)管(guan)。
相關(guan)文獻: 《Apigenin suppresses the apoptosis of H9C2 rat cardiomyocytes subjected to myocardial ischemia?reperfusion injury via upregulation of the PI3K/Akt pathway》 作者:Zhengwen Zhou, Yue Zhang, Luning Lin, Jianmei Zhou 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29901074 《Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na+/K+-ATPase to induce ovarian follicular patency for yolk protein uptake》 作者:Yu-Pu Jing, Hongli An, Shanjing Zhang, Ningbo Wang, Shutang Zhou 期刊:Journal of Biological Chemistry 影響(xiang)因子:4.106 PMID: Ca++Mg++ ——ATP酶活性檢測試劑盒 |