α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒 產品名稱:: α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活(huo)性檢測試劑(ji)盒產品(pin)英文名: αKetoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) Assay Kit產品貨號:BC0710 產地:北(bei)京市通州區馬(ma)駒橋聯(lian)東(dong)U谷8三樓產(chan)品(pin)規格:50管/48樣(yang) 產品商標:solarbio 保(bao)存與運(yun)輸:4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存; 參考價格:1300 庫存狀態:現貨(huo) 關鍵字:: α酮(tong)戊二(er)酸脫氫酶檢(jian)測(ce)試劑盒|α-KGDH檢測試(shi)劑盒|α酮戊二酸脫(tuo)氫酶|試劑盒
簡要介紹(shao): α-KGDH(EC1.2.4.2)廣泛存(cun)在(zai)于(yu)動(dong)物、植物微生物和培養(yang)細胞的線粒體中(zhong),是三羧酸(suan)循環調控關鍵酶之一,催化(hua)α-酮(tong)戊(wu)二酸(suan)氧化(hua)脫羧生成琥珀酰輔酶A。 α-KGDH催化α-酮(tong)戊二酸、NAD+和輔酶(mei)(mei)A生成(cheng)琥珀酰輔酶(mei)(mei)A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有(you)特征(zheng)吸收峰,以NADH的(de)生成(cheng)速率(lv)表(biao)示α-KGDH活性。
產(chan)品(pin)詳細描(miao)述 產品內(nei)容: 試劑一:液體60mL×1瓶(ping),4℃保存; 試劑二:液體0.6mL×1支,-20℃保存(cun); 試劑三:液體55mL×1瓶(ping),4℃保存; 試劑四:粉劑×1支,4℃保存; 試(shi)劑五:粉(fen)劑×1支,4℃保存; 試劑六(liu):粉劑×1支,-20℃保存; 試劑(ji)七(qi):粉劑(ji)×1支(zhi),-20℃保(bao)存; 試劑八:粉劑×1支,-20℃避(bi)光保存。臨用前加入2mL雙蒸水充(chong)分混勻待(dai)用(yong),用(yong)不完的試劑仍-20℃保存。 工作液的(de)配制:臨用前把試劑四(si)、試(shi)劑五、試(shi)劑六、試(shi)劑七轉移(yi)到試(shi)劑三中混(hun)合溶解待用。
產品(pin)說明: α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣(guang)泛存在于動物、植(zhi)物微生物和培養細胞的線粒體中,是(shi)三(san)羧酸循環調控關鍵(jian)酶之一,催化α-酮戊二(er)酸氧化脫(tuo)羧生成琥珀酰輔酶A。 α-KGDH催(cui)化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶(mei)A生(sheng)成琥珀(po)酰輔酶(mei)A、二氧化(hua)碳和(he) NADH,NADH在340 nm有特(te)征吸收(shou)峰,以NADH的生成速率(lv)表示α-KGDH活(huo)性。
試驗所需自備儀器和樣品: 紫外分光光度(du)計(ji)、水浴鍋(guo)、臺(tai)式離心(xin)機、可調式移(yi)液(ye)器(qi)、1mL石英比色皿(min)、研缽(bo)、冰和蒸餾水。 操作步(bu)驟: 一(yi)、α-KGDH的提取 稱取(qu)約0.1g組織或收集約500萬細胞,加入1mL試劑一和(he)10uL試劑二,冰浴用勻漿(jiang)器(qi)或研(yan)缽(bo)充分研(yan)磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清(qing),置冰(bing)上待測。 二、測定步驟(zou) 1. 分光(guang)光(guang)度計預(yu)熱30min以上,調節波(bo)長到(dao)340 nm,蒸餾水調零 2. 空白管: 取1mL工作液加入1mL石英比(bi)色皿(min),37℃孵(fu)育5min后取出比色(se)皿,再依次加入40μL試劑八(ba)和60μL蒸餾水(shui),混勻并(bing)立即測量340nm處0s的吸光值A1,37℃準確反應2min,記(ji)錄340nm處2min時的吸光值A2,計算ΔA空白=A2-A1。 3.測(ce)定管: 取(qu)1mL工作液(ye)加入1mL石英比色皿(min),在37℃(哺(bu)乳動物(wu))或25℃(其它(ta)物種)孵(fu)育5min后(hou)取出比(bi)色皿,再依次加入40μL試劑(ji)八和60μL樣本,混勻并(bing)立即(ji)測量340nm處(chu)0s的吸光(guang)值A3,37℃(哺乳動(dong)物)或25℃(其(qi)它(ta)物種(zhong))中準確反應2min,記錄340nm處(chu)2min時的吸(xi)光值A4,計算ΔA測(ce)定(ding)=A4-A3。 三、α-KGDH活性計(ji)算 1.按樣本蛋白濃度計算 單位的定(ding)義:每mg組織蛋白在(zai)反應體系中每分(fen)鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(ge)酶(mei)活(huo)力單位。 α-KGDH活(huo)性(U/mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(Cpr×V樣(yang)) ÷T =1473.7×(ΔA測(ce)定(ding)-ΔA空白)÷Cpr 2.按樣本(ben)鮮(xian)重計算 單位的定義:每g組織在反應體系中(zhong)每分(fen)鐘生成1 nmol的(de)NADH定義為一個酶活力單(dan)位。 α-KGDH(U/g 鮮重)=[(ΔA測(ce)定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣(yang)÷V樣總×W)÷T =1488.5×(ΔA測定(ding)-ΔA空白)÷W 3. 按細(xi)菌或細(xi)胞密度計算 單位的(de)定義:每1萬(wan)個細菌或細胞在反應體系中每分(fen)鐘生成(cheng)1 nmol的NADH定義為一個(ge)酶活力(li)單位(wei)。 α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總(zong)×109]÷(V樣(yang)÷V樣總×500) ÷T =2.977×(ΔA測定-ΔA空白) V反(fan)總:反(fan)應體系總體積,1.1×10-3 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣(yang):加入樣(yang)本體積(ji),0.06mL;V樣(yang)總:加(jia)入(ru)試劑(ji)一和試劑(ji)二體積,1.01mL;T:反應時間(jian),2min;Cpr:樣本蛋(dan)白質濃度(du),mg/mL;W:樣品質量,g;500:細(xi)菌或細(xi)胞總數,500萬。 注意事項(xiang): 1、測定過(guo)程中(zhong)所有試(shi)劑和(he)樣本在冰上放置,以免(mian)變性(xing)和(he)失活。 2、比(bi)色皿中反應液的溫度必須(xu)保持37℃或25℃,取小燒杯一只(zhi)裝入一定量的37℃或25℃蒸餾(liu)水,將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中(zhong)。在(zai)反(fan)應過程中(zhong)把比色皿連(lian)同(tong)反(fan)應液放在(zai)此燒杯中(zhong)。 3、兩個(ge)人(ren)同(tong)時做此實驗,一個(ge)人(ren)比色,一個(ge)人(ren)計(ji)時,以(yi)保證(zheng)實驗結果的準確性。 4、測定管(guan)的ΔA值在0.01-0.25之(zhi)間(jian),若測定管(guan)的ΔA值大于0.25,需將樣本(ben)進行(xing)稀釋(shi)。
相關文獻: 《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi 期刊:Planta 影響因子:3.06 PMID: 《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影響因子:3.571 PMID:29845188 《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響(xiang)因子:5.657 PMID:31022448 |