脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測試劑盒 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性測定試劑盒說明書 微量法 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。 貨號: BC0665 規格: 100T/48S 產品內容: 提取液:液體 110 mL×1 瓶,4℃保存。 試劑一:液體 20 mL×1 瓶,4℃保存。 試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 3mL 蒸餾水充分溶解。 試劑三:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加入 3.5 mL 蒸餾水充分溶解。 試劑四:液體 8 mL×1 瓶,4℃避光保存。 標準品:粉劑 10 mg×1 支,4℃避光(guang)保存。臨(lin)用前(qian)加入 1 mL 蒸餾水,配(pei)制成 10 mg/mL 的標準溶液。 產品簡介: 脫氫抗壞血(xue)(xue)酸(suan)(suan)還原酶(Dehydroascorbate reductase,DHAR)是植物(wu)體內一種重(zhong)要(yao)的(de)抗氧(yang)化酶,是抗壞血(xue)(xue)酸(suan)(suan)-谷(gu)胱甘肽氧(yang)化循環中促進抗壞血(xue)(xue)酸(suan)(suan)再(zai)生的(de)關鍵酶。DHAR 在循環中利用(yong)抗壞血(xue)(xue)酸(suan)(suan)維持植物(wu)體內抗壞血(xue)(xue)酸(suan)(suan)的(de)正常代謝(xie)水平,保護(hu)細胞組(zu)分抵御氧(yang)化損傷方面(mian)發揮(hui)著重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)。DHAR 催(cui)化還原性谷(gu)胱甘肽(GSH)還原脫氫抗壞血(xue)(xue)酸(suan)(suan)(DHA)生成 AsA,GSH 能和 5,5’-二硫代-雙-(2-硝(xiao)基苯(ben)甲(jia)酸(suan)(suan))(DTNB)反(fan)應產生 2-硝(xiao)基-5-巰基苯(ben)甲(jia)酸(suan)(suan)(TNB)和谷(gu)胱甘肽二硫化物(wu)(GSSG)。TNB 在波長 412 nm 處具有大(da)光吸(xi)收。通過(guo)測定 GSH 的(de)減少速率,計算(suan) DHAR 活性。 自備儀器和用品: 研缽/勻漿器、冰(bing)、低溫離心機、可見分光光度計/酶(mei)標儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔(kong)板、可調式移(yi)液器和蒸(zheng)餾水。 操作步驟: 一、樣品的處理 1. 組織:按照組織質量(g): 提取液體積(mL)1 : 5-10 的比例(建議稱取約 0.1 g 組織,加提取液 1 mL),冰上充分研磨勻漿,8000 g,4℃ 離心 10 min,取上清液置于冰上待測。 2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1 mL 提取液),冰浴超聲超聲破碎細胞(功率 300w,超聲 3s,間隔 7s,總時間 3 min);然后 8000 g,4℃,離心 10 min,取上清置于冰上待測。 3. 血(xue)清等液體(ti):直(zhi)接檢測。 二、DHAR 測定操作: 1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調節波長到 412 nm,蒸餾水調零。 2. 標準(zhun)溶液(ye)的配制(zhi):將 10 mg/mL 標準(zhun)液(ye)用蒸(zheng)餾水稀釋為(wei) 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.0015625mg/mL 的標準(zhun)溶液(ye)備用。 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性檢測試劑盒 |