單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒 產品名稱(cheng):單脫氫抗壞血酸(suan)還原酶(MDHAR)活性檢測試(shi)劑盒(he)產品(pin)英文名: Monodehydroascorbate Reductase (MDHAR) Assay Kit產(chan)品貨號:BC0650 產地(di):北京市通(tong)州(zhou)區馬駒橋聯東U谷8三樓產(chan)品(pin)規格:50管(guan)/48樣 產(chan)品(pin)商(shang)標:solarbio 保存與運輸:4℃保存(cun)或-20℃保存; 參考價格(ge):1040 庫存狀態:現(xian)貨 關(guan)鍵字(zi):單脫氫(qing)抗(kang)壞血酸還原酶|抗壞血酸還原酶|MDHAR活性(xing)檢測(ce)|試劑盒
簡要介(jie)紹: MDHAR 催化(hua) MDHA 還原(yuan)MDHA 生成 AsA;在抗壞血酸氧化(hua)還原(yuan)代謝中(zhong)具有(you)重(zhong)要作用。MDHAR 催化(hua) NADH 還原(yuan)MDHA 生成 AsA和NAD+,NADH在340nm有(you)特征(zheng)吸收峰,但NAD+沒(mei)有(you)。通過測定340nm光吸收下(xia)降速率,來計算MDHAR活性。
產品(pin)詳細描述 商品貨號(hao): | 商品(pin)品(pin)牌: | 規格 | 基本(ben)售價: | 選擇(ze)規(gui)格 | BC0650-50管/48樣(yang) | Solarbio | 50管/48樣 | 1040.00元 | |
產(chan)品內(nei)容: 提取液:液體(ti) 60mL×1 瓶,4℃保(bao)存。 試劑一(yi):液體(ti) 40mL×1 瓶(ping),4℃保存(cun)。 試劑二:粉劑×1 瓶(ping),4℃避光保存。臨用前(qian)加入 5mL 蒸(zheng)餾水充分(fen)溶(rong)解。 試(shi)劑三:粉(fen)劑×1 瓶,-20℃避光(guang)保存(cun)。臨用前加入 5mL 蒸餾水充分溶解。 試劑四:液體×1 瓶,-20℃避光保存。臨(lin)用前加 5mL 試劑一充分溶解(jie)。
產品(pin)說明: MDHAR 催化(hua) MDHA 還原生(sheng)成 AsA,在(zai)抗壞血酸(suan)氧化(hua)還原代謝中具有重要作用(yong)。 MDHAR 催化(hua) NADH 還原 MDHA 生(sheng)成 AsA 和 NAD+,NADH 在(zai) 340 nm 有特征吸收峰(feng),但 是(shi) NAD+沒有。通過(guo)測定(ding) 340 nm 光吸收下降速率,來計算出 MDHAR 活(huo)性。 實驗中所需(xu)儀器及設備: 研缽、冰、臺式離心機(ji)、紫外分光光度計、1mL 石(shi)英比色皿、可調式移(yi)液槍和雙蒸(zheng)水(shui)。
操(cao)作步驟: 一、粗(cu)酶(mei)液提取: 1. 組(zu)織:按照(zhao)組(zu)織質量(g):提取液體積(mL)1:5-10 的比例(li)(建議稱取約 0.1g 組(zu)織,加入 1mL 提取液進(jin)行冰(bing)浴勻漿。10000rpm,4℃離(li)心(xin) 10min,取上清置(zhi)冰(bing)上待測。 2. 細(xi)菌、真菌:按照細(xi)胞數量(liang)(10 4個):提取液體(ti)積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬 細(xi)胞加入(ru) 1mL 提取液),冰浴超聲超聲破碎細(xi)胞(功率(lv) 300w,超聲 3s,間隔 7s,總時(shi)間 3min); 然后 10000rpm,4℃,離(li)心 10min,取上清置(zhi)于(yu)冰上待測。 二、MDHAR 測定操作: 1. 分(fen)光光度計預熱 30 min,調節波長到 340 nm,蒸(zheng)餾水調零。 2. 試劑一在 25℃水(shui)浴鍋(guo)中預熱 30 min。 3. 依(yi)次在(zai)石英(ying)比色皿中加(jia)入(ru)下列試劑
試劑名稱(μL) | 試劑(ji)二 | 試(shi)劑三 | 試劑四 | 試劑一 | 蒸餾(liu)水(shui) | 上(shang)清(qing)液 | 空白管 | 100 | 100 | 100 | 600 | 100 | | 測定(ding)管 | | 100 |
迅速混勻后于(yu) 340nm 比色,記錄 30s 和 150s 的吸(xi)光(guang)值。分別記為 A1、A2,ΔA=A1-A2,得(de)到 △A 測定、△A 空白(bai)。
三、MDHAR 活性計(ji)算(suan): (1)按(an)蛋白濃度計算 MDHAR 活(huo)(huo)性單位(wei)定義:25℃中每毫克(ke)蛋(dan)白(bai)每分鐘氧化(hua) 1μmol NADH 為一個(ge)酶活(huo)(huo)單位(wei)。 MDHAR (U/mg prot) = [(△A 測(ce)定管-△A 空(kong)白(bai)管)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(Cpr×V 樣)÷T =0.804×(△A 測(ce)定管-△A 空(kong)白(bai)管) ÷Cpr (2)按樣本鮮(xian)重(zhong)計算 MDHAR 活(huo)性單位定義:25℃中每克樣(yang)品(pin)每分(fen)鐘氧化(hua) 1μmol NADH 為 1 一個酶活(huo)單位。 MDHAR (U/g 鮮重(zhong)) =[(△A 測定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反總×10 6]÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W)÷T =0.804×(△A 測定管-△A 空白管) ÷W (3)按細胞數量計算(suan) MDHAR 活性單(dan)位(wei)定義:25℃中每(mei) 10 4個細(xi)胞(bao)每(mei)分鐘氧化 1μmol NADH 為 1 一個酶活單(dan)位(wei)。 MDHAR (U/10 4 cell) =[ (△A 測定管(guan)-△A 空白(bai)管(guan))÷ε÷d×V 反總(zong)×10 6]÷(細(xi)胞(bao)數量(liang)×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T =0.804×(△A 測定管(guan)-△A 空白(bai)管(guan)) ÷細(xi)胞(bao)數量(liang) ε:NADH 摩爾消光系數,6220 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 反 總:反應體系總體積,1mL=0.001 L;V 樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1mL;V 樣總: 提取液體積,1mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質濃度需要另外測定,建議使用本公司蛋 白質含量 BCA 試劑盒;W :樣品質量,g;細胞數量:以 10 4為單位計量,萬個;T:反應時間, 2min
相關文獻: 《Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings》 作者(zhe):Ya-li Zhou,Su-fang Huo,Li-ting Wang,Jiang-fei Meng,Zhen-wen Zhang,Zhu-mei Xi 期(qi)刊:Plant Physiology and Biochemistry 影響因子(zi):3.404 PMID:30099273 單脫氫抗壞血酸還原酶活性檢測試劑盒 |