蛋(dan)白分(fen)子量標準，常稱之為蛋白Marker。在(zai)免疫印跡（Western blot）試驗中，分子量(liang)Marker雖(sui)不起眼，但(dan)意義重大，是陽性對照，是大小(xiao)的(de)(de)標準，是必須的(de)(de)。只有Marker精確無誤了，實驗結(jie)果(guo)才有說服力。除(chu)此之外(wai)，蛋白Marker還能夠提(ti)示(shi)電泳是否正常，轉移是否成功等信(xin)息。
光(guang)陰似(si)箭，日月如梭，不知(zhi)不覺(jue)中蛋白Marker經歷了普通Marker、預染(ran)Marker和曝光(guang)Marker三個(ge)發展階段。
1.0代產(chan)品(pin)：普通蛋白Marker
普(pu)通(tong)蛋白(bai)(bai)Marker，或(huo)稱之為未染(ran)色蛋白(bai)(bai)分(fen)子(zi)(zi)量(liang)標(biao)準，也叫預(yu)混（pre mixed）蛋白(bai)(bai)分(fen)子(zi)(zi)量(liang)Marker，是簡(jian)單，也是最準確(que)的(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)。由于沒有附帶(dai)染(ran)料(liao)分(fen)子(zi)(zi)或(huo)者是標(biao)記分(fen)子(zi)(zi)，所示大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)正(zheng)好是蛋白(bai)(bai)原本的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)，是早(zao)期精確(que)判斷(duan)蛋白(bai)(bai)大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)的(de)(de)(de)(de)產品。普(pu)通(tong)Marker多數都選(xuan)用(yong)(yong)預(yu)混和(he)的(de)(de)(de)(de)Marker，方(fang)便(bian)不(bu)(bu)同大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)的(de)(de)(de)(de)蛋白(bai)(bai)比(bi)較。預(yu)混的(de)(de)(de)(de)Marker通(tong)常有一(yi)(yi)個(ge)或(huo)者幾(ji)個(ge)條(tiao)帶(dai)加倍濃度作為區別，用(yong)(yong)于幫助判斷(duan)每個(ge)條(tiao)帶(dai)的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)。在選(xuan)擇(ze)上來(lai)說，當然(ran)是選(xuan)擇(ze)其中(zhong)至少有一(yi)(yi)條(tiao)條(tiao)帶(dai)和(he)自己的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)蛋白(bai)(bai)大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)相近(jin)的(de)(de)(de)(de)，越近(jin)越好。普(pu)通(tong)Marker不(bu)(bu)如(ru)預(yu)染(ran)Marker好用(yong)(yong)，因為電泳(yong)過程(cheng)中(zhong)看不(bu)(bu)到，要和(he)目標(biao)蛋白(bai)(bai)一(yi)(yi)起等到最后(hou)(hou)染(ran)色才能見真容，無法對實驗過程(cheng)起預(yu)示參照(zhao)作用(yong)(yong)。屬于“后(hou)(hou)知后(hou)(hou)覺"型的(de)(de)(de)(de)，當然(ran)還是比(bi)“不(bu)(bu)知不(bu)(bu)覺"不(bu)(bu)做(zuo)對照(zhao)的(de)(de)(de)(de)要好。按照(zhao)條(tiao)帶(dai)的(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)(zi)量(liang)大(da)(da)(da)小(xiao)(xiao)通(tong)常有三(san)種(zhong)：寬分(fen)子(zi)(zi)量(liang)蛋白(bai)(bai)Marker、高(gao)分(fen)子(zi)(zi)量(liang)蛋白(bai)(bai)Marker、低(di)分(fen)子(zi)(zi)量(liang)蛋白(bai)(bai)Marker。
從實驗總體考(kao)慮的(de)(de)，應(ying)該(gai)選范圍盡量(liang)寬，條(tiao)帶分(fen)布(bu)比較均勻的(de)(de)，這樣你的(de)(de)蛋白(bai)無論在(zai)哪個區(qu)間都容易(yi)判斷，避免正好落(luo)在(zai)一段空白(bai)區(qu)的(de)(de)風險(xian)。不(bu)(bu)過，條(tiao)帶越多(duo)，價格可能(neng)也會越貴(gui)。如(ru)果(guo)買(mai)的(de)(de)是大(da)包裝，就(jiu)應(ying)該(gai)考(kao)慮分(fen)裝。要考(kao)慮到反(fan)復凍融對蛋白(bai)的(de)(de)傷害，不(bu)(bu)能(neng)因為(wei)實驗虐(nve)我(wo)，我(wo)就(jiu)虐(nve)蛋白(bai)吧(ba)。另外要知(zhi)道(dao)，寬譜的(de)(de)Marker不(bu)(bu)一定每條(tiao)都能(neng)看(kan)到的(de)(de)，特(te)別是Mini Cell。還有(you)，如(ru)果(guo)側重大(da)蛋白(bai)，那小的(de)(de)可能(neng)就(jiu)已經跑掉了，跟質(zhi)量(liang)無關。
在一般的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)電(dian)泳當中，低分子量(liang)Marker（PR1400）使用較多(duo)，除了(le)有(you)指示蛋(dan)白(bai)(bai)大小(xiao)的(de)(de)(de)作(zuo)用以(yi)外，有(you)時還可以(yi)用作(zuo)粗略的(de)(de)(de)定量(liang)。還有(you)一類特(te)(te)別(bie)小(xiao)的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)Marker，比如用于30kD以(yi)下蛋(dan)白(bai)(bai)或者(zhe)多(duo)肽的(de)(de)(de)。其中GE的(de)(de)(de)從2kD到16kD之間(jian)有(you)6條(tiao)帶的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)Marker挺不錯，另(ling)外提(ti)醒一句，特(te)(te)別(bie)小(xiao)的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)Marker條(tiao)帶如果要顯色漂亮，上樣(yang)量(liang)一定要足夠。
2.0代產(chan)品：預染蛋白Marker
預(yu)(yu)染(ran)蛋(dan)白(bai)分子量（prestained Marker），也(ye)叫預(yu)(yu)染(ran)Marker，是將Marker的(de)蛋(dan)白(bai)，通過(guo)與染(ran)料共價耦聯(lian)，在(zai)電(dian)泳(yong)過(guo)程中或者轉膜(mo)(mo)時可(ke)(ke)(ke)以肉眼(yan)直接觀(guan)察(cha)到的(de)一種蛋(dan)白(bai)分子量Marker。預(yu)(yu)染(ran)Marker帶(dai)來了很多方便，可(ke)(ke)(ke)以幫助我(wo)們在(zai)電(dian)泳(yong)時、電(dian)泳(yong)后(hou)(hou)，以及轉膜(mo)(mo)后(hou)(hou)監測(ce)(ce)電(dian)泳(yong)情況(kuang)和估計遷(qian)移率。比如，已知垂直電(dian)泳(yong)最(zui)佳(jia)分辨(bian)區(qu)域大約(yue)在(zai)膠(jiao)的(de)2/3處，如果使用(yong)預(yu)(yu)染(ran)Marker就可(ke)(ke)(ke)以預(yu)(yu)測(ce)(ce)目(mu)標(biao)蛋(dan)白(bai)進(jin)入最(zui)佳(jia)分辨(bian)區(qu)時停(ting)止電(dian)泳(yong)以得到最(zui)佳(jia)分辨(bian)效(xiao)果；如果觀(guan)察(cha)到Marker電(dian)泳(yong)異常(chang)也(ye)可(ke)(ke)(ke)以及時終止電(dian)泳(yong)。另外在(zai)Western Blot轉膜(mo)(mo)以后(hou)(hou)可(ke)(ke)(ke)以直接觀(guan)察(cha)蛋(dan)白(bai)轉膜(mo)(mo)是否完成。Marker和染料一(yi)(yi)同轉移到膜(mo)上，可(ke)以(yi)(yi)方(fang)便(bian)的(de)(de)(de)(de)用來對照顯(xian)色(se)后的(de)(de)(de)(de)目標蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)大小(xiao)。預染Marker有(you)這么多優(you)點，所(suo)(suo)以(yi)(yi)現在應用的(de)(de)(de)(de)很(hen)多。值得注意的(de)(de)(de)(de)是(shi)，預染蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)Marker與染料共價耦聯，在不(bu)(bu)同的(de)(de)(de)(de)緩沖條(tiao)件下電(dian)(dian)泳(yong)時遷(qian)移特(te)性可(ke)能會發生某(mou)些變化，可(ke)能會導(dao)致一(yi)(yi)些偏(pian)差，所(suo)(suo)以(yi)(yi)不(bu)(bu)太(tai)適合精確(que)定位蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。如(ru)果拋(pao)開(kai)分(fen)(fen)子量的(de)(de)(de)(de)偏(pian)差，預染Marker還是(shi)很(hen)好用的(de)(de)(de)(de)，也可(ke)以(yi)(yi)和普(pu)通(tong)Marker一(yi)(yi)起使用，做精確(que)對比(bi)。 預染Marker可(ke)以(yi)(yi)分(fen)(fen)為兩種(zhong)：單色(se)預染和多色(se)預染（又稱為彩虹(hong)Marker）。單色(se)的(de)(de)(de)(de)Marker通(tong)常是(shi)利(li)用其中某(mou)些條(tiao)帶加倍濃度來提示其大小(xiao)的(de)(de)(de)(de)，觀察(cha)起來不(bu)(bu)是(shi)很(hen)方(fang)便(bian)。彩虹(hong)Marker（PR1910），比(bi)較容易區分(fen)(fen)條(tiao)帶的(de)(de)(de)(de)大小(xiao)。還有(you)一(yi)(yi)點特(te)別要(yao)注意，由于轉膜(mo)是(shi)一(yi)(yi)個(ge)將膠里的(de)(de)(de)(de)Marker轉印(yin)膜(mo)上，所(suo)(suo)以(yi)(yi)需要(yao)的(de)(de)(de)(de)上樣量相對少一(yi)(yi)些。如(ru)果想要(yao)在電(dian)(dian)泳(yong)過程中看到美麗的(de)(de)(de)(de)“彩虹(hong)"或(huo)者(zhe)漂(piao)亮的(de)(de)(de)(de)單色(se)Marker，往往需要(yao)比(bi)說明書里多加一(yi)(yi)些Marker的(de)(de)(de)(de)。省錢與美麗，背(bei)道(dao)而(er)馳。
2.5代產品：間接曝光Marker
普通(tong)Marker和預(yu)染Marker還有一個缺點(dian)就是不能夠在(zai)(zai)最(zui)(zui)(zui)終Western曝(pu)光的(de)(de)(de)膠(jiao)片或(huo)(huo)者掃描照片中顯(xian)色(se)，最(zui)(zui)(zui)終判斷Western結果，還需(xu)要將照片和膜進行比對，容易(yi)出現偏差或(huo)(huo)者錯誤(wu)。很多產(chan)品(pin)在(zai)(zai)向最(zui)(zui)(zui)終的(de)(de)(de)顯(xian)色(se)做(zuo)努力，Biorad的(de)(de)(de)Precision Plus Protein WesternC 就是其中的(de)(de)(de)一例。該產(chan)品(pin)的(de)(de)(de)所有條帶都含有 Strep-標簽，當使用 StrepTactin-HRP時可被化學發光檢(jian)測最(zui)(zui)(zui)終顯(xian)示(shi)在(zai)(zai)凝膠(jiao)轉印膜膠(jiao)片或(huo)(huo) CCD 圖像(xiang)中。這個好像(xiang)有些(xie)復雜，需(xu)要輔(fu)助另外(wai)的(de)(de)(de)產(chan)品(pin)，或(huo)(huo)者多余的(de)(de)(de)步驟，我們就把該類產(chan)品(pin)定(ding)義為蛋(dan)白Marker的(de)(de)(de)第2.5代(dai)產(chan)品(pin)，或(huo)(huo)者叫做(zuo)的(de)(de)(de)蛋(dan)白Marker 2S吧（apple手機的(de)(de)(de)命名規則）。
3.0代產品：曝(pu)光Marker
說了這么(me)多，大家也明白(bai)了蛋(dan)白(bai)Marker的(de)第三代產品是什么(me)樣(yang)子(zi)的(de)。3.0版本的(de)蛋(dan)白(bai)Marker，就(jiu)是最終的(de)Marker條帶會(hui)和檢測目標蛋(dan)白(bai)會(hui)一同出現在顯色的(de)圖片(pian)中(zhong)，我們又稱(cheng)之為曝(pu)光(guang)Marker（Exposure Marker）。曝(pu)光(guang)Marker的(de)原理是，每個條帶蛋(dan)白(bai)都含有IgG結合位點(dian)，可(ke)以(yi)與(yu)人(ren)、小(xiao)鼠、大鼠、山羊(yang)、綿羊(yang)以(yi)及兔子(zi)來源的(de)IgG恒定區結合，因(yin)此(ci)(ci)在實驗過(guo)程中(zhong)這些蛋(dan)白(bai)可(ke)以(yi)直接或間接地結合二(er)抗(kang)，與(yu)實驗樣(yang)品信號(hao)同時在X膠片(pian)上曝(pu)光(guang)顯色。由(you)此(ci)(ci)可(ke)以(yi)更(geng)方便準確地判(pan)斷實驗樣(yang)品信號(hao)的(de)位置(zhi)和大小(xiao)。
曝光(guang)(guang)Marker克服(fu)了使用(yong)常規預(yu)(yu)染(ran)(ran)(ran) Marker評估(gu)蛋白轉膜(mo)效率(lv)(lv)和(he)樣品抗(kang)原信號(hao)時所存在的(de)(de)(de)一(yi)些(xie)(xie)不(bu)足(zu)。這些(xie)(xie)不(bu)足(zu)主要表現(xian)為：1、預(yu)(yu)染(ran)(ran)(ran)marker經過(guo)化學修飾后(hou)分子量與SDS-PAGE上(shang)表現(xian)的(de)(de)(de)遷移率(lv)(lv)不(bu)一(yi)致；2、預(yu)(yu)染(ran)(ran)(ran)marker無法在X光(guang)(guang)膠(jiao)片(pian)上(shang)顯(xian)色，X光(guang)(guang)膠(jiao)片(pian)上(shang)顯(xian)色的(de)(de)(de)條帶需要與轉移到膜(mo)上(shang)的(de)(de)(de)預(yu)(yu)染(ran)(ran)(ran) Marker比對才能(neng)確認蛋白的(de)(de)(de)位置和(he)大(da)小，整個過(guo)程比較(jiao)繁(fan)瑣同時容(rong)易造成誤(wu)差甚至是(shi)錯(cuo)誤(wu)。3、也是(shi)最重(zhong)要的(de)(de)(de)一(yi)點(dian)，目(mu)的(de)(de)(de)條帶和(he)曝光(guang)(guang)Marker出現(xian)在同一(yi)圖片(pian)中，而(er)不(bu)是(shi)后(hou)期的(de)(de)(de)拼接，這樣的(de)(de)(de)結果更讓別人(ren)信賴(lai)。現(xian)在很(hen)多大(da)文章都在使用(yong)曝光(guang)(guang)Marker，可以(yi)預(yu)(yu)見，以(yi)后(hou)文獻上(shang)逐漸都會(hui)使用(yong)曝光(guang)(guang)Marker。
